МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИДЕНТИФИКАЦИИ И ИЗОМЕРСПЕЦИФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-п-ДИОКСИНОВ И ДИБЕНЗОФУРАНОВ В МЯСЕ, ПТИЦЕ, РЫБЕ, ПРОДУКТАХ И СУБПРОДУКТАХ ИЗ НИХ, А ТАКЖЕ В ДРУГИХ ЖИРОСОДЕРЖАЩИХ ПРОДУКТАХ И КОРМАХ МЕТОДОМ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ 1. Назначение и область применения 2. Значения характеристик погрешности методики 3. Сущность методики 4. Средства измерений 5. Вспомогательные устройства и лабораторная посуда 6. Реактивы и материалы 7. Требования безопасности 8. Требования к квалификации оператора 9. Отбор, хранение и транспортировка проб 10 Подготовка к проведению анализа 11. Проведение анализа 12. Вычисление результатов измерений 13. Контроль погрешности результатов измерений Приложение (обязательное) Форма представления результатов анализа Методические указания по отбору проб мяса, мясопродуктов, рыбы, рыбопродуктов, кормов и других жиросодержащих продуктов для определения полихлорированных дибензо-п-диоксинов и дибензофуранов методом хромато-масс-спектрометрии
УТВЕРЖДАЮ УТВЕРЖДАЮ Главный государственный первый заместитель Министра ветеринарный инспектор здравоохранения, Российской Федерации Главный государственный В.М.Авилов санитарный врач Российской Федерации Г.Г.Онищенко МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИДЕНТИФИКАЦИИ И ИЗОМЕРСПЕЦИФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-п-ДИОКСИНОВ И ДИБЕНЗОФУРАНОВ В МЯСЕ, ПТИЦЕ, РЫБЕ, ПРОДУКТАХ И СУБПРОДУКТАХ ИЗ НИХ, А ТАКЖЕ В ДРУГИХ ЖИРОСОДЕРЖАЩИХ ПРОДУКТАХ И КОРМАХ МЕТОДОМ ХРОМАТО-МАСС- СПЕКТРОМЕТРИИ Москва, 1999 г. Методика разработана: Российским научно-исследовательским центром чрезвычайных ситуаций Мини- стерства здравоохранения Российской Федерации (С.Ю.Семенов, В.Н.Смирнов, Г.В.Зыкова, Ю.Н.Дубров, Г.Г.Финаков); Научно-производственным объединением "Тайфун" Роскомгидромета (А.Д.Орлянский, Р.И.Первунина, Д.П.Самсонов, В.П.Кирюхин, Н.П.Жирюхина, Т.В.Рахманова); Институтом проблем эволюции и экологии им. А.Н.Северцова РАН (В.Е.Соколов, Н.А.Клюев, Е.С.Бродский, В.Г.Жильников, В.С.Сойфер, Е.И.Соболева). Методика рассмотрена Лабораторным Советом Госсанэпидслужбы Российской Федерации 9 июня 1999 года . Методика имеет свидетельство о метрологической аттестации № М 10/97 от 31.01.97 г., выданное УНИИМ. 1. Назначение и область применения. Методика предназначена для идентификации выполнения измерений массовых кон- центраций (далее концентраций) 17 высокотоксичных 2,3,7,8-замещенных полихло- рированных дибензо-п-диоксинов (ПХДД) и дибензофуранов (ПХДФ): 2,3,7,8- ТетраХДД; 1,2,3,7,8-ПентаХДД; 1,2,3,4,7,8-ГексаХДД; 1,2,3,6,7,8-ГексаХДД; 1,2,3,7,8,9-ГексаХДД; 1,2,3,4,6,7,8-ГептаХДД; Окта-ХДД; 2,3,7,8-ТетраХДФ; 1,2,3,7,8-ПентаХДФ; 2,3,4,7,8-ПентаХДФ; 1,2,3,4,7,8-ГексаХДФ; 1,2,3,6,7,8- ГексаХДФ; 2,3,4,6,7,8-ГексаХДФ; 1,2,3,7,8,9-ГексаХДФ; 1,2,3,4,6,7,8-ГептаХДФ; 1,2,3,4,7,8,9-ГептаХДФ; Окта-ХДФ , для которых установлены эквиваленты токсич- ности согласно «Гигиеническим нормативам ГН 2.1.6.014-94. Предельно допустимая концентрация ПХДД и ПХДФ в атмосферном воздухе насе- ленных мест» , в мясе, птице, рыбе, продуктах и субпродуктах из них, а также в дру- гих жиросодержащих продуктах и кормах методом хромато-масс-спектрометрии*. Предел обнаружения тетра-, пента-, гекса-, гепта- и октахлорированных изомеров со- ставляет соответственно 0,5; 0,5; 1; 2; 5 нг/кг при массе анализируемой пробы 10-200 г. Установленные допустимые уровни содержания диоксинов (в пересчете на диок- синовые эквиваленты) согласно распоряжению Минздрава СССР № 142-9/105 от 5 мая 1991 года составляют : для мяса - 0,9 нг/кг, в пересчете на жир - 3,3 нг/кг, для рыбы -11,0 нг/кг, в пересчете на жир - 88,0 нг/кг. Определению не мешает присутствие в образцах других соединений. Диапазон определяемых массовых концентраций ПХДД и ПХДФ составляет 0,5-1000 нг/кг при массе анализируемой пробы 200 г. Методика предназначена для целей государственного контроля в учреждениях Минздрава и Минсельхозпрода . 2. Значения характеристик погрешности методики. В связи с тем, что требования к точности результатов измерений массовых концентраций 2,3,7,8-хлорзамещенных ПХДД и ПХДФ в пробах не регламентированы, за норму погрешности приняты значения характеристики погрешности, полученные при аттестации. При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измере- ний характеристика погрешности (D) результата анализа Х с вероятностью Р=0,95 не превышает значений, приведенных в табл.1. Таблица 1. Диапазон измерений, значения характеристики относительной погрешности и ее со- ставляющих при доверительной вероятности Р=0,95
| Диапазон измеряемых с одержаний 2,3,7,8- замещенных полихлори- рованных дибензо-п- диоксинов и дибензофу- ранов,нг/кг |
Характеристика погрешности (границы интервала, в котором погрешность находится с заданной вероятностью), +-d,% |
Характеристик а случайной составляющей погрешности (средне- квадратическое отклонение случайной состовляющей погрешности), s(d),% |
Характеристика систематической составляющей по- грешности (грани- цы интервала, в ко- тором систематиче- ская состовляющая погрешности находится с заданной вероятностью), +- dc,% |
| от 0,5 до 10 вкл. | 74 | 34 | 33 |
| св.10 до 200 вкл. | 48 | 22 | 20 |
| св.200 до 1000 вкл. | 31 | 13 | 18 |
*Примечание: методика позволяет проводить измерения и других изомеров ПХДД и ПХДФ. 3. Сущность методики Методика основана на экстракции из проб ПХДД и ПХДФ органическим раствори- телем, в которую предварительно внесены изотопномеченые внутренние стандарты ПХДД и ПХДФ (стандарты-имитаторы), очистке экстракта от сопутствующих со- единений, мешающих определению ПХДД и ПХДФ, и последующем его анализе с по- мощью сочетания высокоэффективной капиллярной газовой хроматографии и масс- спектрометрии (ГХ-МС). Идентификацию 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ осуществляют по временам удерживания и соотношению площадей хроматографических пиков идентифици- руемых компонентов и стандартов-имитаторов на регистрируемых ионных масс-хроматограммах. Концентрации ПХДД и ПХДФ определяют по площадям соответствующих хрома- тографических пиков по методу внутреннего стандарта. 4. Средства измерений 4.1. Хромато-масс-спектрометрическая система, включающая: -газовый хроматограф, (Varian 3400, Hewlett-Packard 5890A или другой с метроло- гическими характеристиками, не уступающими указанным), позволяющий работать с капиллярными колонками, с инжектором split-splitless или on-column, соединенный с масс-спектрометром высокого или низкого разрешения, позволяющим вести регистра- цию отдельных ионов с заданными массами и оснащенного компьютерной системой обработки данных (Finnigan MAT 8200, MAT-95, HP 5988, HP 5972, ITD 700, Nermag R 10-10 или другие с подобными характеристиками); - капиллярные хроматографические колонки 50 (60) м х 0,25 (0,32) мм с неподвиж- ной неполярной фазой типа SE-54 (DB-5, Ultra-2 и др.) и полярной фазой SP 2331, СР Sil 88, DB-DIOXIN, HP-23 (допускается использование и других колонок с непод- вижными фазами, обеспечивающими разделение 2,3,7,8-замещенных изомеров и дру- гих ПХДД и ПХДФ); -микрошприцы типа Hamilton (или другие, аналогичные им) вместимостью 1, 10, 100, 500 мкл с ценой деления 0,01, 0,1, 1,0, 10 мкл, соответственно. 4.2.Стандартные растворы изотопномеченых ПХДД: 13 - C12-2,3,7,8-ТХДД с концентрацией (50 ± 5) мкг/куб.см производства фирмы Cam- bridge Isotope Laboratory (CIL); 13 - C12-1,2,3,4-ТХДД, концентрацией (50 ± 5) мкг/куб.см производства фирмы CIL. Допускается использование других 13 C12-2,3,7,8--хлорзамещенных производных 37 13 37 13 или их композиций, стандартных растворов на основе С14, С6 фирмы CIL, а также других фирм с содержанием основного компонента не менее 99% и с погрешностью аттестованного значения концентраций не выше, чем у стандартов фирмы CIL. 4.3. Стандартный раствор смеси всех 17 определяемых 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ с концентрацией (40 - 400) нг/см3 производства фирмы CIL (EDF- 7999). Допускается использование стандартных растворов индивидуальных компонен- тов других фирм с содержанием основного компонента не менее 95% и с погрешно- стью аттестованного значения концентраций не выше, чем у стандартов фирмы CIL. 4.4. Стандартный образец смеси 2,3,7,8-замещенных ПХДД: ГСО N6543-92 (2,3,7,8-ТХДД - 1мкг/куб.см, 1,2,3,7,8-ПеХДД - 1 мкг/куб.см, 1,2,3,4,7,8-ГкХДД - 5 мкг/куб.см 1,2,3,6,7,8-ГпХДД - 10 мкг/куб.см, ОХДД -20 мкг/куб.см с относительной погрешностью аттестованного значения с вероятностью 0,95 не превышающей 10%). 4.5. Аттестованная смесь 1,2,3,7/1,2,3,8 ТХДД; 2,3,7,8 ТХДД и 1,4,7,8 ТХДД с концентрацией (200 ± 50) нг/куб.см каждого компонента и содержанием основных ком- понентов не менее 90%. 4.6. Термометр технический ртутный прямой с диапазоном измеряемой темпера- туры от 0 до 100° С и ценой деления 1° С. 4.7. Термометр технический ртутный прямой с диапазоном измеряемой темпера- туры от 0 до 300° С и ценой деления 2° С. 4.8. Дозаторы пипеточные от 5 до 1000 мкл. 4.9. Цилиндры мерные исполнения 3 вместимостью 25, 50, 100, 1000 мл, ГОСТ 1770-74. 4.10. Колбы мерные наливные 2-25-2, 2-50-2, ГОСТ 1770-74. 4.11. Пипетки 1-2-1,2-2-5, ГОСТ 29227-91. 4.12. Весы лабораторные общего назначения 2 класса с пределом допустимой по- грешности до 0,1 мг, ГОСТ 24104-88. 5 . Вспомогательные устройства и лабораторная посуда. 5.1. Ротационный испаритель типа ИР-1 М2 по ТУ 25-1173 102-84 5.2. Сушильный шкаф типа 2В-151 по МРТУ 42-1411-61 или аналогичный. 5.3. Плитка электрическая с закрытой спиралью мощностью 800 Вт типа ЭПШ- 1-0,8/220 по ГОСТ 14919-83. 5.4. Баня водяная ультразвуковая типа B-12,Branson a Smithkline сорапу, США или аналогичная. 5.5. Устройство для встряхивания жидкостей типа LE 203, Венгрия или анало- гичная. 5.6. Концентратор Кудерна-Даниша с испарительной колбой вместимостью 50 куб.см, концентрирующей пробиркой вместимостью 10 куб.см и трехшариковой колонкой Снайдера фирмы Supeico или аналогичный. 5.7. Эксикатор 2-250 ГОСТ 9147-80Е. 5.8. Колонка стеклянная длиной 400 мм и внутренним диаметром 8 мм. 5.9-Колонка стеклянная длиной 400 мм и внутренним диаметром 10 мм. 5.10.Флаконы для образцов с коническим дном и герметичной пробкой типа Whea- ton Mini-Vials вместимостью 1 и 2 куб.см. 5.11.Флаконы для образцов с герметичной пробкой вместимостью 4, 10 куб.см. 5.12.Резервуар стеклянный Мишель-Миллер с тефлоновыми пробками длиной 450 см и внутренним диаметром 25 мм, Aldrich Chemical Company Z 17, 951-5. 5.13. Воронка стеклянная с коническим дном. Колба Бунзена стеклянная. Колба коническая вместимостью 750 куб.см. Трубка стеклянная длиной 15 см, внешним диаметром 7 м внутренним диаметром 3,5 мм. 5.14. Трубки полиэтиленовые внешним диаметром 2 мм. 5.15. Трубки из силиконовой резины. 5.16. Центрифуга лабораторная любой марки со стеклянными стаканами. 5.17. Резистор ПЭВ-15 ТУ - ОЖ0467546. 5.18. Баллон с сжатым воздухом. 5.19. Редуктор кислородный. 5.20. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82: воронки лабораторные В-36-50, В-100-150; воронки делительные В Д-1-100 ХС; дефлегматор 250-14/23-29/32-ТС; - насадки для экстрагирования (аппарат Сокслета) НЭТ-500ТС; колбы конические вместимостью Кн-1-50-14/23 ТС, Кн-1-250-24/29 ТС; колбы круглодонные К-1-500-29/32 ТС, К-1-1000-29/32 ТС К-1-2000-29/32 ТС; колбы Кьельдаля 1-50-14/23 ТС, 1-100-14/23 ТС; насос водоструйный; стаканы В-1-50 ТС, В-1-100 ТС; холодильник ХПТ-1-3 00-14/23 ХС; чаша выпарная; эксикатор 1-230. Допускается использование вспомогательных устройств и лабораторной посуды других марок, обеспечивающих проведение анализа с заданной погрешностью. 6. Реактивы и материалы 6.1. Ацетон о.с.ч., ТУ-6-09-3513-86. 6.2. Толуол, х.ч., ТУ 6-09-4305-76. 6.3. Метанол, х.ч, ГОСТ 6995-77. 6.4. н-Гексан ч., ТУ 6-09-3731-74. 6.5. Метиленхлорид х.ч., ТУ 6-09-06-856-71. 6.6. Спирт этиловый ГОСТ 18300-87. 6.7. Нонан, х.ч., ТУ 6-09-1997-77 6.8. Тридекан ч., ТУ 6-09-3732-74. 6.9. Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77. б.10.Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76. 6.11.Натрий хлористый х.ч., ГОСТ 4237-77, 6.12. Кальций хлористый безводный ч., ТУ 6-09-4711-81. 6.13. Калия гидроксид х.ч., ГОСТ ГОСТ 24363-80, 6.14. Алюминий оксид. Acid Alumina A64, 100-200 mech, Bio-Rad, кат.№132- 1340. 6.15. Гелий марки В, ТУ 51-940-80. 6.16. Азот о.с.ч., ГОСТ 9293-74. 6.17.Целит 545,АШесп. 6.18. Силикагель Kieseigel 60, 70-230 мкм (E.Merk). 6.19. Волокнистый кварцевый материал, ТУ 6-11-15-191-81 6.20. Вата медицинская гигроскопическая, ГОСТ 5556-81. 6.21. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72. Допускается использование реактивов и материалов других марок после их про- верки путем проведения всей процедуры анализа для холостого опыта и проб с до- бавлением аттестованных контрольных смесей с применением этих реагентов и оценки полученных результатов с учетом характеристик погрешности. 7. Требования безопасности . Всего существуют 75 различных ПХДД и 135 ПХДФ, отличающихся количеством и местом присоединения атомов хлора. Наиболее токсичны 17 изомеров ПХДД и ПХДФ, замещенные атомами хлора в 2,3,7,8-положениях. Самым токсичным является 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксин (2,3,7,8-ТХДД), который представляет собой кристаллическое вещество с температурой плавления 305- -8 307 ° С, растворимостью в воде 2х10 %, химически инертное, термостойкое, не раз- лагаемое кислотами и щелочами. 2,3,7,8-ТХДД высокотоксичен даже в малых кон- центрациях. Токсичность других ПХДД и ПХДФ выражается в эквивалентах токсич- ности (диоксиновых эквивалентах, ДЭ) - долях от токсичности 2,3,7,8-ТХДД, принятой за единицу (см.приложение). Требования безопасности устанавливают в соответствии со специальными инст- рукциями по работе с диоксином (например, "Инструкция по технике безопасности по работе с 2,3,7,8 -ТХДД", утверждена 3 ГУ при МЗ СССР от 02.12.1986 г.). Помещения, в которых проводятся подготовка проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией. Исходные стандартные образцы для приготовле- ния градуировочных растворов и аттестованных смесей должны храниться в запи- раемом металлическом шкафу. Все операции по приготовлению аттестованных смесей и градуировочных рас- творов, содержащих ТХДД и его меченые аналоги, добавление стандартов к образцу, подготовку образца к анализу, следует проводить под тягой в вытяжном шкафу. Пробы, подготовленные к анализу, и растворы стандартных образцов, градуи- ровочных и контрольных растворов, аттестованных смесей следует держать в ампу- лах, закрытых завинчивающейся или запрессованной крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем. Меры по оказанию первой помощи при попадании диоксина и его растворов на кожу, в глаза и желудок проводят в соответствии с "Временной инструкцией по ле- чению отравлений диоксином", утвержденной заместителем Министра здравоохра- нения СССР от 10 сентября 1986 г. 8. Требования к квалификации оператора. Подготовку проб может производить инженер, техник или лаборант со средним специальным или высшим образованием, прошедший соответствующую подготовку и имеющий навыки работы в химической лаборатории. Анализ может проводить ин- женер или техник со средним специальным или высшим образованием, имеющий навыки работы на газовом хроматографе и масс-спектрометре. Все работающие должны быть проинструктированы о работе с веществами 1-2 класса опасности, ор- ганическими растворителями, правилах работы в химической лаборатории и работы с электроустановками. 9. Отбор, хранение и транспортировка проб. Условия отбора, хранения и транспортировки проб приведены в Приложении № 2 к настоящей методике. 10. Подготовка к проведению анализа. 10.1. Подготовка растворителей и сорбентов. 10.1.1. Подготовка растворителей. Органические растворители перегоняют в стеклянной посуде. 1 дм3 гексана помещают в делительную воронку, добавляют 70 г концентрированной серной кислоты и энергично встряхивают в течение 2-3 мин. По- сле разделения фаз нижний (кислотный) слой отбрасывают. Обработку кислотой повторяют до тех пор, пока кислота не будет окрашиваться только в слабо-желтый цвет. Затем гексан промывают тремя порциями дистиллированной воды до рН 6, 2%-и раствором гидроксида натрия и снова дистиллированной водой. Растворители с маркой «pesticide grade» (для анализа пестицидов) могут использоваться без дополнительной очистки. 10.1.2. Активирование силикагеля и оксида алюминия. Силикагель промывают последовательно двойными объемами метанола и метиленхлорида, затем активируют в муфельной печи 2 суток при 130° С. Оксид алюминия активируют при 350-400°С в течение 17 ч в стеклянных ампулах по 4 г в каждой, после чего ампулы запаивают. 10.1.3. Силикагель, импрегнированный серной кислотой. Смесь 150 г активиро- ванного силикагеля и 100 г концентрированной серной кислоты перемешивают на встряхивателе или качалке до отсутствия комков (не менее 15 мин.). 10.1.4. Силикагель, импрегнированный гидроксидом цезия. Готовят метанольный раствор гидроокиси цезия, для чего 150 г гидроокиси цезия растворяют в 50 куб.см ме- танола. К 250 г активированного силикагеля приливают метанольный раствор гидрооки- си цезия и перемешивают до отсутствия комков, добавляют еще 250 куб.см метанола и кипятят в течение 1,5 ч., фильтруют под вакуумом, промывают 500 куб.см метанола и 500 куб.см хлористого метилена, сушат в эксикаторе в вакууме. Возможна замена гидро- ксида цезия на гидроксид натрия или калия. 10.1.5. Натрий сернокислый прокаливают при температуре 400° С в течение 4 ча- сов. При подготовке и использовании каждой новой партии реактивов и материалов или замене одного из них проводят проверку путем выполнения всей процедуры ана- лиза для холостого опыта и контрольной аттестованной смеси, оценивая результаты с учетом характеристик погрешности. Допускается использование растворителей и сорбентов других марок, обеспечивающих проведение анализа с заданной погрешно- стью. 10.2. Приготовление растворов ПХДД и ПХДФ 13 10.2.1. Приготовление исходного раствора меченого стандарта С12-2,3,7,8- ТХДД с концентрацией 1 мкг/куб.см. В мерную колбу вместимостью 25 куб.см вво- 13 дят дозатором или пипеткой 0,5 куб.см раствора С12-2,3,7,8-ТХДД с концентрацией 50 мкг/куб.см и добавляют нонан до метки. 13 10.2.2. Приготовление рабочего раствора меченого стандарта С12-2,3,7,8-ТХДД с концентрацией 10 нг/куб.см. В мерную колбу вместимостью 50 куб.см вводят дозатором 13 или пипеткой 0,5 куб.см раствора С12-2,3,7,8--ТХДД с концентрацией 1 мкг/куб.см и добавляют нонан до метки. Аналогично готовят исходные и рабочие растворы других изотопномеченых стандартов. 10.2.3. Приготовление градуировочных растворов. 10.2.3.1. Для приготовления градуировочных растворов используется ГСО N 6543-92. Градуировочным раствором А является исходный стандартный раствор ГСО N 6543-92 с концентрацией 2,3,7,8-ТХДД 1 мкг/куб.см, 1,2,3,7,8-ПеХДД- 1 мкг/куб.см, 1,2,3,4,7,8-ГкХДД - 5 мкг/куб.см , 1,2,3,6,7,8-ГпХДД - 10 мкг/куб.см, ОХДД - 20 мкг/куб.см. 10.2.3.2.Приготовление градуировочного раствора Б с концентрацией 2,3,7,8- ТХДД 0,8 мкг/куб.см (концентрации остальных компонентов изменяются пропор- ционально). Во флакон типа Wheaton вместимостью 4 куб.см вводят дозатором 0,8 куб.см раствора А и добавляют 0,2 куб.см толуола. 10.2.3.3.Приготовление градуировочного раствора В с концентрацией 2,3,7,8- ТХДД 0,6 мкг/куб.см. Во флакон типа Wheaton вместимостью 4 куб.см вводят доза- тором 0,75 куб.см раствора Б и добавляют 0,25 куб.см толуола. 10.2.3.4.Приготовление градуировочного раствора Г с концентрацией 2,3,7,8- ТХДД 0,36 мкг/куб.см. Во флакон типа Wheaton вместимостью 4 куб.см вводят дозатором 0,6 куб.см раствора В и добавляют 0,4 куб.см толуола. 10.2.3.5.Приготовление градуировочного раствора Д с концентрацией 2,3,7,8- ТХДД 0,18 мкг/куб.см. Во флакон типа Wheaton вместимостью 4 куб.см вводят доза- тором 0,5 куб.см раствора Г и добавляют 0,5 куб.см толуола. 10.3. Подготовка и экстракция проб. 10.3.1. Подготовка проб. Мягкие ткани разрезают на куски и размельчают в шнековой мясорубке с диа- метром отверстий 3-5 мм. 10.3. 2. Экстракция ПХДД и ПХДФ из проб. В подготовленную пробу дозатором вносят 0,1 куб.см рабочего раствора меченого 13 го стандарта С12-2,3,7,8-ТХДД с концентрацией 10 нг/куб.см, добавляют 200 куб.см гексана, 200 куб.см ацетона и 70 г измельченного в порошок сульфата аммония, гомоге- низируют в течение 5 мин. и оставляют до расслоения. Органическую фазу отделяют декантацией, остаток отфильтровывают че- рез неплотный бумажный или стеклобумажный фильтр на воронке Бюхнера под не- большим вакуумом. Водный слой фильтрата отбрасывают, органический слой присоединяют к ор- ганической фазе от декантации. Добавляют 20 мл ацетона и полученный раствор да- лее подвергают очистке. 10.4. Очистка экстрактов. 10.4.1. Выделение ПХДД и ПХДФ из экстракта на колонке с активированным углем. 10.4.1.1. Подготовка угольной колонки. На стеклянной трубке длиной 150 мм, внешним диаметром 7 мм и внутренним диаметром 3,5 мм делают перетяжку на рас- стоянии 30 мм от края. С противоположной от перетяжки стороны вводят тампон из кварцевой ваты длиной 10 мм. В колонку помещают 200 мг смеси активированного угля ФАС-МД с целитом (1:10) и уплотняют колонку постукиванием. Вводят анало- гичный тампон из кварцевой ваты, окончательно уплотняя сорбент. Вторую перетяжку делают на расстоянии 10 мм от второго тампона. Концы трубки оплавляют. К изготовленной угольной колонке присоединяют резервуар Мишель- Миллер посредством полиэтиленовой трубки, уплотненной силиконовым шлангом. 10.4.1.2. Выделение ПХДД и ПХДФ. Экстракт переносят в резервуар, создают в резервуаре давление не более 2 атм., устанавливая скорость пропускания раствора через колонку 2 мл/мин. После пропускания всего раствора давление в резервуаре сбрасывают, помещают в резервуар 20 мл смеси ацетона и гексана (50:50 объем.) и промывают ею колонку, пропуская ее с такой же скоростью. Гексан-ацетоновую фракцию упаривают на роторном испарителе в вакууме при 40° до полной отгонки растворителя и взвешивают остаток, определяя количество жира. Колонку отсоеди- няют от резервуара и присоединяют другим концом. Включают в сеть 220 В резистор ПЭВ-15 и через 10 мин колонку помещают внутрь резистора для нагрева. В резервуар помещают 5 мл толуола и устанавливают давление, достаточное для пропускания то- луола со скоростью 2 мл/мин. Элюат содержит ПХДД и ПХДФ. 10.4.2. Очистка экстракта на «многослойной» колонке с модифицированным силикагелем. 10.4.2.1. Подготовка колонки. В стеклянную колонку длиной 150 мм и внутрен- ним диаметром 10 мм помещают подложку из стеклянной ваты, на которую помеща- ют 1 куб.см силикагеля, импрегнированного гидроксидом цезия, 1 куб.см сульфата натрия, 1 куб.см силикагеля, импрегнированного серной кислотой, 1 куб.см сульфата натрия, 1 куб.см силикагеля, импрегнированного серной кислотой, 1 куб.см сульфата натрия и 1 куб.см силикагеля. 10.4.2.2. Очистка экстракта. Толуольный экстракт разбавляют 45 мл гексана, пе- ремешивают и вносят в колонку с модифицированным силикагелем. Смывают остат- ки с колбы двумя порциями по 5 куб.см гексана и также переносят в колонку. После прохождения раствора колонку промывают 50 куб.см гексана. Экстракты объединяют и далее очищают на колонке с оксидом алюминия. 10.4.3. Очистка на колонке с оксидом алюминия. 10.4.3.1. Подготовка колонки с оксидом алюминия. В стеклянную колонку дли- ной 150 мм и внутренним диаметром 8 мм помещают подложку из волокнистого кварцевого материала и 4 г оксида алюминия, а сверху - 2 куб.см сернокислого натрия. Колонку промывают 50 куб.см гексана. 10.4.3.2.Очистка экстракта. Объединенный экстракт пропускают через колонку с оксидом алюминия. Колонку промывают последовательно 20 куб.см гексана, 40 куб.см смеси гексана и метиленхлорида (95:5 объем.) и элюируют 50 куб.см смеси гексана и ме- тиленхлорида (50:50 объем.). Элюат упаривают до объема около 2 куб.см в колбе с де- флегматором, переносят во флакон Mini-Vial вместимостью 1 куб.см, добавляют 10 мкл тридекана и упаривают в токе азота до полного испарения растворителя (кроме тридекана). Подготовленные для анализа пробы могут храниться до 40 суток при температу- ре не выше 4°С..gif)
.gif){kind=small}