Продолжение
3. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ИММУННАЯ СИСТЕМА
Специфическая иммунная система состоит из клеточных и гуморальных
компонентов. От неспецифических факторов они отличаются специфичностью
взаимодействия с чужеродными агентами. Специфичность иммунных реакций
определяется лимфоцитами и иммуноглобулинами.
Состояние специфического звена иммунной системы рыб важно знать при оценке
иммунного статуса, определении потенциальных возможностей организма рыб
противостоять воздействию агрессивных факторов среды и установлении характера
влияния иммуномодулирующих и вакцинных средств. Оно оценивается по данньм
анализа клеточных и гуморальных факторов иммунитета.
3.1. КЛЕТОЧНЫЕ ФАКТОРЫ
Основную роль в формировании специфического клеточного иммунного ответа рыб
на чужеродные агенты играют лимфоциты.
3.1.1. ЛИМФОЦИТЫ
3.1.1.1. Метод определения абсолютного и относительного содержания
лимфоцитов основан на установлении относительного числа лимфоцитов в процентах
по лейкоцитарной формуле и проведении расчета содержания клеток, приходящихся
на долю лимфоцитов из общего количества лейкоцитов, обнаруженных в 1 мл крови
при прямом подсчете.
3.1.1.2. Определение Т- и В-лимфоцитов.
Существуют разнообразные способы определения Т- и В-лимфоцитов в организме
рыб. Они основаны на учете характера реагирования лимфоцитов с маркерами или со
специфическими антисыворотками против отдельных клеточных популяций. В качестве
маркеров используют эритроциты барана, мышей, зимозан. Т- и В-зависимые
митогены (конкавалин А, фитогемагглютинин, липополисахариды, птичий туберкулин)
и т.д. Для оценки качественного состава и количества отдельных типов клеток
применяются методы розеткообразования или реакция бластрансформации. —
Определение содержания Т-лимфоцитов методом Е-розеткообразования.
Принцип метода. Т-лимфоциты в организме позвоночных, в т.ч. рыб,
выполняют разнообразные функции, связанные с распознаванием "своего" и "чужого"
и поддержанием генетического постоянства внутренней среды. Данный показатель
используется при оценке состояния Т-клеточного иммунитета. Т-лимфоциты несут на
своей поверхности рецепторы для эритроцитов барана (ЭБ). Благодаря наличию
таких рецепторов Т-лимфоциты способны вступать в реакцию с эритроцитами барана
и образовывать так называемые розетки. Подсчитав количество Е-розеткообразующих
клеток, судят о количественном содержании (относительном и абсолютном) Т-
лимфоцитов в исследуемом образце.
- Оборудование, реагенты и реактивы: 0,5 %-ная суспензия эритроцитов барана;
раствор Олсвера;
фосфатный буфер (рН-7,4); раствор Хенкса (или среда 199); 3 %-ный раствор
глутарового альдегида; метиловый зеленый; пиронин; хлороформ; лимфоциты; фикол-
верографин (плотностью - 1,007 г/мл); силиконизированные или пластиковые
пробирки; центрифуга настольная; пипетки, пробирки центрифужные; гепарин; кровь
рыб; микроскоп; камера Горяева. Материалы для исследования, ход определения и
учет результатов.
Из крови рыб вьщеляют лимфоциты путем центрифугирования в градиенте фикол-
верографина. В силиконизированную пробирку, смоченную раствором гепарина (или
цитрата натрия), набирают 1-2 мл крови рыб, разводят 1:1 раствором Хенкса; на
дно сухой пробирки аккуратно наливают 1,5-2 мл градиента плотности; наклонив
пробирку под углом 45°; пробирки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 40
минут; после центрифугирования пипеткой собирают кольцо лимфоцитов, находящееся
между слоями плазмы и градиентом плотности; клетки дважды отмывают раствором
Хенкса при 1500 об/мин в течение 10 минут; подсчитывают концентрацию лимфоцитов
в камере Горяева и доводят раствором Хенкса (или средой 199) до 2 млн. кл/мл. -
трижды отмытые эритроциты барана разводят средой 199 до 0,5% концентрации. В
силиконизированную пробирку объемом 1-2 мл вносят 0,1 мл 0,5% раствора
эритроцитов барана, к эритроцитам барана добавляют 0,1 мл суспензии лимфоцитов
(2 млн. кл/мл), смесь инкубируют 5 мин при 26° С, после инкубации смесь
центрифугируют в течение 5 мин при 750 об/мин (около 200 g) и инкубируют при
26° С в течение 1 часа. По истечении инкубации клетки фиксируют глутаровым
альдегидом (0,05 мл 3% раствора) и после отмывания от глутарового альдегида
делают мазки. Мазки фиксируют в метаноле, красят метил-грюн-пиронином по Браше
и микроскопируют. Число Е-розеткообразующих клеток в процентах вычисляют в
результате подсчета 200-300 лимфоцитов в препарате. За розеткообразующую клетку
(РОК) принимают лимфоцит, присоединивший не менее 3 эритроцитов барана.
Абсолютные цифры Е-розеткообразующих клеток в 1 мкл выводят на основании
количества лимфоцитов в 1 мкл крови. Лимфоциты можно выделить из суспензии
клеток селезенки, лимфоидной ткани про- и мезонефроса и тимуса.
— Определение Т-, В-, Д- и 0-лимфоцитов (по Мэндес, 1973).
Принцип метода. При смешивании лимфоидных клеток рыб с эритроцитами барана
(ЭБ), частичками зимозана, сенсибилизированными макроглобулиновыми антителами с
комплементом, происходит их избирательная адсорбция лимфоидными клетками: на Т-
лимфоцитах адсорбируются эритроциты барана, на В-лимфоцитах - частицы зимозана,
на Д-лимфоцитах - частицы зимозана и эритроциты барана; 0-лимфоциты остаются
свободными от эритроцитов и частичек зимозана. Данный метод применяется для
идентификации популяционной структуры лимфоцитов.
- Компоненты, материалы и оборудование. Лф - суспензия лимфоцитов рыб,
концентрацией 2 млн. клеток/мл, в среде 199 (или Хенкса). Способ получения Лф
(см. выше). ЭБ - 0,5%-ная взвесь эритроцитов барана - индикаторы для Т-
лимфоцитов; частицы зимозана конъюгированные с комплементом (индикаторы для В-
лимфоцитов). Разбавители: физраствор, среда 199. Материалы и оборудование:
гепарин, хлористый аммоний, 0,2%-ный раствор трипановый сини,
глутаральдегид,разделяющий раствор с плотностью 1,077 г/мл, силиконизированные
центрифужные и другие пробирки, пипетки, счетные камеры Горяева или Бюркера,
холодильник, фазовоконтрастный микроскоп.
- Техника постановки реакции. В силиконизированную пробирку приливают по
0,1 мл взвеси лимфоцитов, 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана и частички
зимозана с комплементом. Смесь клеток инкубируют 5 мин при 26°С, центрифугируют
5 мин при 800-1000 об/мин и вновь инкубируют при 12° С - 60 мин. Осадок
осторожно ресуспендируют, наносят каплю взвеси клеток на предметное стекло,
накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Из капли взвеси можно готовить
мазки на предметных стеклах и покрасить их по Романовскому-Гимза.
- Учет и оценка результатов реакции осуществляются одновременно и
параллельно в световом и фазово-контрастном микроскопах. Просматривают 200
лимфоцитов и определяют процент РОК. Т-лимфоцит образует розетку из 3 и более
ЭБ, В-лимфоцит - из 3 и более частиц зимозана; Д-лимфоцит образует смешанную
розетку - 2 ЭБ + 2 и более частиц зимозана; 0-лимфоцит розеток не образует.
3.2. ГУМОРАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ.
3.2.1. Иммуноглобулины. Они являются биохимической основой специфического
гуморального иммунитета, выполняют функцию специфических антител к конкретным
антигенам, синтезируются плазматическими клетками (В-лимфоцитами) и
секретируются в кровь или тканевые жидкости. Основная их часть относится к
гамма - глобулиновой фракции сыворотки крови.
Методы определения содержания в организме рыб иммуноглобулинов основаны на
оценке содержания гамма-глобулинов в сыворотке крови или других биологических
жидкостях. Простыми и доступными приемами исследования гамма-глобулинов в
сыворотке крови и других жидкостях являются методы электрофореза, хроматографии
на анионообменниках, осаждения насыщенными растворами фосфатов или сульфатов.
Существуют также иммунологические методы определения содержания гамма-
глобулинов у рыб с помощью антисывороток.
3.2.1.1. Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови рыб по гамма-
глобулину методом осаждения.
- Принцип метода. При взаимодействия с насыщенными растворами фосфатов,
определенной концентрации гамма - глобулины осаждаются, изменяя тем самым
оптическую плотность исследуемого образца. Определение производится параллельно
с другими фракциями сыворотки крови (альбуминами, альфа и бета-глобулинами), по
изменению оптической плотности (ОП) на ФЭКе.
- Оборудование и реактивы. ФЭК, химические пробирки, пипетки на 1, 2, 5,
10 мл, бюретка на 100 мл, мерные колбы на 100 и 500 мл, холодильник, сыворотка
крови, фосфатные растворы (основной и рабочий), штативы для пробирок.
- Материал для исследования, ход определения и учет результатов. Вначале
готовят основной фосфатный раствор: 335 г гидроокиси натрия растворяют в 400 мл
дистиллированной воды, добавляют 226,8 г фосфорнокислого калия однозамещенного.
После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют
дистиллированную воду до объема 500 мл, затем готовят рабочие фосфатные
растворы для осаждения каждой фракции белков. Берут 4 мерных колбы на 100 мл,
которые нумеруют соответственно N 1, 2, 3 и 4. В каждую колбу вносят строго
определенное количество основного фосфатного раствора: 92,4 мл - N 1, 74,9 мл -
N 2, 58,8 мл - N 3, 48,7 мл - N 4 и до метки 100 мл доливают дистиллированную
воду. После этого рабочие растворы в колбах тщательно размешивают путем
встряхивания (при хранении добавляют 1 каплю хлороформа на 100 мл
раствора).После приготовления фосфатных растворов приступают к определению
белковых фракций в исследуемых образцах. На каждую пробу сыворотки крови берут
6 пробирок и нумеруют:
О, 1, 2, 3, 4, 5. В пробирку под цифрой 0 вносятся 10 мл дистиллированной воды,
в пробирки под номерами 1, 2, 3 и 4 - по 5 мл соответствующих этим цифрам
рабочих фосфатных растворов. В пробирку N5 вносят 0.5 мл исследуемой сыворотки
крови, 0.75 мл дистиллированной воды и 3.75 мл основного фосфатного раствора,
пробирку закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5-6 раз,
после чего из этой пробирки переносят по 0.5 мл смеси в пробирки N 1, 2, 3, 4 и
1 мл в пробирку под номером 0 (контроль).
Содержимое пробирок тщательно и осторожно перемешивают, избегая
образования пены и пузырьков воздуха и выдерживают 15 мин при комнатной
температуре. По истечении указанного срока осуществляют измерение ОП растворов
в пробирках N 1, 2, 3, 4 против контроля (N 0) на ФЭКе при красном
светофильтре в кювете с длинной оптического пути 1 см.
Определение оптической плотности проводится сначала в пробирке N4, затем в
пробирках N 3, 2и1.
Расчет результатов производится по схеме:
ОП пробирки N1 - ОП пробирки N2 = ОП альбуминов;
ОП пробирки N2 - ОП пробирки N3 = ОП альфа-глобулинов;
ОП пробирки N3 - ОП пробирки N4 = ОП бета-глобулинов;
ОП пробирки N4 = ОП гамма-глобулинов.
Принимая сумму ОП альбуминов и всех глобулиновых фракций за 100% (ОП
пробирки N1), вычисляют долю содержания каждой фракции в процентах. Процентное
содержание гамма-глобулинов определяют
по формуле: Относительное OHgg x 100
содержание = -------------,
гамма-глобулина,% E20П
где
OПgg - гамма-глобулина (ОП - пробирки N 4),
E0n-сумма ОП всех белковых фракций (ОП пробирки N 1),
100 - коэффициент перевода содержания гамма-глобулина в %.
Зная концентрацию общего белка в единице объема можно произвести перерасчет
в абсолютные величины. Ошибка метода составляет ± 4%.
3.2.2. АНТИТЕЛА.
Антитела представляют собой сывороточные белки, синтезируемые В-лимфоцитами
при попадании в организм антигена или чужеродных тел и вступающие с ними во
взаимодействие. Главными свойствами антител являются специфичность и
гетерогенность. Специфичность антител определяется антигеном, вызывающим их
синтез. Рыбы, как и высшие позвоночные, синтезируют разнообразные по структуре
и функции антитела: агглютинины, преципитины, антитоксины,
комплементсвязывающие и вируснейтрализующие антитела, гемолизины, полные и
неполные. Антитела по происхождению подразделяются на естественные и
индуцируемые (образующиеся после парентерального и энтерального введения
антигена). Они являются одной из информационных структур иммунной системы,
выполняющих функцию иммунологической памяти об антигене. Благодаря высокой
специфичности антитела используются при определении природы антигенов
вызывающих их синтез, напряженности активно приобретенного иммунитета,
характера течения процесса иммуногенеза и характера влияния благоприятных и
неблагоприятных факторов на иммунную систему рыб.
Существуют многочисленные методы определения содержания антител в организме
рыб: серологические, иммуноэлектрофоретические, радиоиммунные,
иммуноферментные, иммунодиффузные, лазерные.
Наиболее простыми и общепринятыми методами определения антител в организме
рыб являются: реакция агглютинации, реакция агглютинации латекс-антигена (или
антител).
3.2.2.1. Определение антител в реакции агглютинации.
Реакция агглютинации (РА) используется для идентификации возбудителя
болезни с помощью стандартной (референтной) агглютинирующей сыворотки.
Агглютинацией называется склеивание микробов агглютининами сыворотки в
присутствии электролитов, т.е. солевых растворов.
- Принцип метода основан на установлении способности сыворотки крови иммунных
рыб склеивать микроорганизмы, вызвавшие этот иммунный ответ.
- Оборудование и реактивы: пробирки стерильные; 0,65%-ный стерильный раствор
натрия хлорида;
сыворотка крови обследуемых рыб; водяная баня, отрегулированная на 60° С;
одномиллиардная взвесь суточной культуры инактивированных микроорганизмов
возбудителей болезни рыб, приготовленная на 0.65%- ном стерильном растворе
натрия хлорида; термостат, отрегулированный на 26° С; агглютиноскоп;
пастеровские пипетки, пробирки, шприцы и инъекционные иглы для взятия крови -
стерильные.
- Материал для исследования, ход определения и учет результатов.
В штатив размещают ряд из 8 или более пробирок. В первую вносят 0.2 мл
сыворотки, в остальные - такой же объем 0.65%-ного стерильного раствора натрия
хлорида. Во вторую пробирку к разбавителю добавляют 0.2 мл цельной сыворотки и
тщательно перемешивают содержимое пробирки пипетированием. Стандартный объем
(0.2 мл) смеси переносят в следующую (третью) пробирку, тщательно смешивают с
разбавителем и переносят в четвертую, и так далее до предпоследней пробирки
ряда, из которой стандартный объем смеси удаляют. В результате получают серию
разведении, в которой содержание исходной сыворотки (и соответственно антител)
убывает в геометрической прогрессии 1:2, 1:4, 1:8 и т.д. до 1:64 и более. После
внесения 0,2 мл жидкости в очередную пробирку пипетку заменяют на новую.
В пробирки с разведенной сывороткой (кроме первой - контроль сыворотки) и в
последнюю пробирку с физраствором (контроль антигена) вносят по 0.05 мл (1
капля) тест-антигена, тщательно перемешивают до получения равномерной взвеси и
помещают в термостат на 2-3 часа при 26°С. Контролем служат сыворотка и антиген
без сыворотки (первая и последняя пробирки ряда). Штатив с пробирками вынимают
из термостата и проводят предварительную оценку реакции, затем оставляют при
комнатной температуре на 20-24 часа. Окончательную оценку реакции осуществляют
с помощью агглютиноскопа. Учет реакции проводят по четырехбалльной системе:
"++++" - полная агглютинация (осадок рыхлый в виде зонтика, жидкость над
осадком прозрачная, при встряхивании видны хлопья или зерна различной
величины);
"+++" - полная агглютинация (осадок такой же, надосадочная жидкость менее
прозрачна);
"++" - неполная агглютинация (осадок небольшой, надосадочная жидкость
непрозрачная);
"+" - следы агглютинации (осадок незначительный, надосадочная жидкость
непрозрачная);
"-" - отрицательная реакция (осадка нет, взвесь равномерно мутная).
В контроле антигена - осадка нет, взвесь равномерно мутная. Наивысшее
разведение исследуемой сыворотки, в которой происходит агглютинация добавленных
микробных клеток при оценке не менее, чем на два креста, считают ее титром.
3.2.2.2.Реакция агглютинации латекс-андигена (или антител) - РАЛАг (Зингер,
Плотц, 1956).
- Принцип метода. Реакция агглютинации мелкодисперсных частиц латекса,
нагруженных:
антигеном (АГ), под воздействием специфических антител (AT) иммунной сыворотки
или антителами, при взаимодействии с гомологичным АГ, применяется для
обнаружения содержания антител у иммунных рыб к разным АГ и диагностики
возбудителя болезни.
- Компоненты и материалы. АГ - 5%-ный раствор растворимого антигена (в качестве
источника АГ могут служить гомогенаты аутоантигенов, возбудителей болезни,
вакцины, сыворотки крови и т.д.). Исследуемая сыворотка рыб. 10%-ная суспензия
частиц полистиролового латекса стандартной величины - от 0,77 до 0,81 мкм на
0.65% растворе NaCl. Хранят при 2-4° С, но не дольше 4-х недель. Разбавители:
боратный или глициновый буфер с рН 8,1-8,3. Боратный буфер: 50 мл 0,1 М
раствора борной кислоты (6,184 г Н3ВО3 растворяют в 1000 мл диет. воды), 5,9 мл
0,1%-ного раствора NaOH и 100 мл 0,85%-ного раствора хлорида натрия. Глициновый
буфер: к 1 л 0,1 М раствора глицина, доведенного до рН 8,2 с помощью 1 н.
раствора NaOH, добавляют Юг NaCL. Материалы: пипетки, пробирки, колбы и др.
- Техника постановки реакции.
Для сенсибилизации частиц латекса к 0,1 мл 10%-ной суспензии мелко
дисперсных частиц добавляют 0,5 мл 5%-ного раствора АГ и 9,4 мл боратного
буфера. Суспензию тщательно перемешивают и выдерживают 2 ч при 26°С. Постановку
реакции латекс-агглютинации начинают с приготовления в дополнительном ряду
пробирок разведении сыворотки исследуемых рыб на боратном буфере в соотношениях
от 1:10, 1:20 до 1:1280-1:2560.
- Капельная реакция латекс-агглютинации.
В ряд микропробирок вносят по 2 капли соответствующих разведении
исследуемой сыворотки и добавляют по 1 капле суспензии частиц латекса,
сенсибилизированных соответствующим АГ. В контроле смешивают аналогичные объемы
частиц латекса с разведениями инактивированной нормальной сыворотки. Штатив с
пробирками встряхивают и выдерживают при 26° С 30 мин. Затем смеси
центрифугируют при 1500 об/мин в течение 3 мин, осторожно встряхивают и
учитывают результат реакции.
- Пробирочная реакция латекс-агглютинации. В опытный ряд пробирок приливают по
1 мл соответствующих разведении исследуемой сыворотки и добавляют по 1 мл
латекс-АГ. Контрольные смеси: 1) боратный буфер+суспензия латекс-АГ; 2)
разведения нормальной сыворотки + суспензия латекс-АГ. Пробирки встряхивают,
помещают в водяную баню при 26°С на 2 ч, центрифугируют при 1500 об/мин в
течение 10 мин, осторожно встряхивают и учитывают результат реакции.
- Учет и оценка результатов реакции производятся по образованию зерен
латексного агглютината и просветлению жидкости в пробирке. Учет результатов
целесообразнее проводить в агглютиноскопе;
оценка проводится по 4-балльной системе.
4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАПРЯЖЕННОСТИ ИММУНИТЕТА.
Под напряженностью иммунитета следует понимать способность организма рыб
противостоять агрессивному влиянию возбудителей болезни и их продуктам
метаболизма и распада (экзо- или эндотоксинам). Напряженность иммунитета
отражает совокупную деятельность всех функциональных структур иммунной
системы рыб на уровне целостного организма.
Одним из объективных способов оценки напряженности иммунитета или
устойчивости рыб к паразитам, вызывающим инфекционные и инвазионные болезни,
является заражение рыб патогенными организмами или их токсинами.
Оценка напряженности иммунитета применяется в селекционной работе, при
определении эффективности вакцинации, последствий влияния благоприятных и
неблагоприятных для жизнедеятельности биотических и абиотических (включая
токсические) факторов на выживаемость рыб.
4.1. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРЯЖЕННОСТИ ИММУНИТЕТА
(с использованием A. hydrophila)
4.1.1. Принцип метода основан на экспериментальном заражении рыб
вирулентной культурой, вызывающей 50% или 100%-ную гибель исследуемого вида
рыб. Причем, в группе рыб с низким уровнем естественной резистентности LD5o
меньше, чем в группе рыб с более высоким уровнем напряженности естественного
иммунитета.
4.1.2. Оборудование и реактивы: аквариумы, пробирки, шприцы, рыба,
суточная культура вирулентных бактерий - возбудителя инфекционной болезни рыб.
4.1.3. Материал для исследования, ход определения и учет результатов.
Отбирают 60 экз. рыб, имеющих средний для данной партии рыб показатель
навески. В заполненные водой (с температурой не ниже 18°С и не выше 26° С пять
(и более) аквариумов или бассейнов с аэрацией или садки, установленные в
карантинном пруду, помещают по 25 экз. (из расчета не более 5 г ихтиомассы на 1
л воды) отобранных рыб, которым предварительно вводят внутрибрюшинно
одномиллиардную взвесь суточной вирулентной культуры бактерий A. hydrophila,
приготовленную на 0.65%-ном стерильном растворе натрия хлорида в дозах 0.125;
0.25; 0.5; 0.75; 1 мл (и более). Наблюдение за инфицированной рыбой ведут в
течение 10 суток с момента инъекции микробной взвеси и по выживаемости
устанавливают дозу инфекта, вызывающую 50 или 100%-ную гибель рыб, с
характерными для данной инфекции клиническими и патологоанатомическими изме-
нениями. Расчет летальной дозы, вызывающей 50%-ную гибель рыб (LD50), проводят
по методу Рида и Менча (Гончаров, 1973).
Расчитанной дозой LDgo инфекта проводят заражение по 25 экз. исследуемых
рыб, относящихся к одному виду, возрасту, с одинаковой массой, но находящихся
при разных условиях содержания, либо на разных этапах иммуногенеза, течения
болезни и т.д. Постановку и проведение опыта, а также учет результатов
осуществляют так же, как и при отработке дозы LD50-Напряженность иммунитета
определяют с учетом процента погибших рыб в опытной группе в сравнении с
контролем.
По окончании аквариумных опытов проводят обеззараживание воды в аквариумах
путем создания в них 10%-ной концентрации формалина или 10%-ного раствора
хлорной извести. Через час воду спускают в канализационную сеть, а рыб сжигают.
Весь инвентарь и посуду, бывшие в употреблении при работе с больной рыбой,
дезинфицируют в 10%-ном растворе формалина в течение часа.
При завершении биологической пробы в бетонированных бассейнах, земляных
садках, карантинных прудах рыбу сжигают и проводят дезинфекцию воды путем
хлорирования, доводя содержание свободного хлора в воде до 4-5 мг/л. Сутки
спустя воду пропускают через известковый фильтр (используют только свежую
негашеную известь). После этого проводят дезинфекцию ложа прудов или садков и
бассейнов негашеной или хлорной известью и оставляют их без воды
на срок не менее месяца.
С утверждением настоящих Методических указаний утрачивают силу
"Методические указания по определению уровней естественной резистентности
организма рыб (к инфекционным болезням)", утвержденные ГУВ Госагропрома СССР
13.07.87 № 432-3
Методические указания по определению уровня естественной резистентности и
оценке иммунного статуса рыб подготовлены специалистами ИБВВ РАН и ВНИИПРХ.
Приложение 1
к Методическим указаниям по определению
уровня естественной резистентности и
оценке иммунного статуса рыб, утв.
Уровень фагоцитарной активности лейкоцитов карпа на стадии
поглощения, %
Возраст рыб, время
фагоцитоза с момента
термостатирования
или введения
объекта фагоцитоза
|
Низкий
|
Cpeдний
|
Высокий
|
Процент
фагоцитоза
|
Фагоцитар-
ный индекс
|
Процент
фагоцитоза
|
|
.gif)