Продолжение
                 1. Дифференциация родовых групп энтеробактерий
                          по биохимическим свойствам

Примечание. Здесь и далее (+) - положительная реакция; (-) - отрицательня реакция; 
(х) - различные варианты реакции. 



                  2. Дифференциация иерсиний различных видов

        Для бактерий рода иерсиния характерно наличие фермента уреазы (разложение мочевины) 
и отсутствие ферментов лактозы, фенилаланиндезаминазы, лизиндекарбоксилазы, а также 
неспособность продуцировать сероводород. Иерсинии ферментируют глюкозу, подвижны при 
температуре 22°С и неподвижны или малоподвижны при температуре 37°С, обладают положительной 
реакцией с метиловым красным, вариабельны по таким признаками как продукция индола, 
утилизация цитрата на среде Симонса, наличие фермента орнитиндекарбоксилазы.
        Иерсинии вида энтероколитика (см. табл. 2) разлагают мальтозу, дают положительную 
реакцию Фогеса-Проскауэра при температуре 22 град. С, утилизируют цитрат при выращивании 
на среде Симомса при температуре 22°С, не ферментируют рамнозу.
        По биохимическим свойствам вид иерсиния энтероколитика включает пять биоваров, 
обладающих различной степенью патогенности. Признаки, характеризующие свойства биоваров 
иерсинии энтероколитика (по В.Г. Кузнецову, 1986), представлены в таблице 3.

                      3. Биохимические свойства биоваров J. enterocolitica

       Для облегчения работы по идентификации иерсиний рекомендуется использовать схему 
(рис. 1).
        Внутри каждого биовара иерсиний существует ряд серологических вариантов, в связи с 
чем в процессе исследования штаммов, имеюхщих свойства иерсинии энтероколитика, проводят 
определение их сероваров по способности агглютинироваться на стекле со специфическими 
сыворотками, полученными путем гипериммунизации кроликов референтными штаммами иерсиния 
энтероколитика сероваров 0:3, 0:5; 27; 0:8 и 0:9. Сероспецифические сыворотки готовит
ВНИИ экспериментальной ветеринарии (г. Москва).
        Для проведения серотипизации иерсиний энтероколитика на предметные стекла наносят по 
одной капле сыворотки соответствующего серовара и физиологического раствора. Затем бактерио-
логической петлей берут небольшое количество 2-суточной агаровой исследуемой культуры, 
суспендируют в капле физиологического раствора и смешивают с сывороткой. Предметное стекло 
покачивают в течение 1-3 мин и учитывают результат. Одновременно ставят контроль и с 
негативной сывороткой.
        Положительная реакция характеризуется образованием агглютината (хлопьев, зерен) в 
специфической сыворотке и отсутствием агглютинации микроорганизмов с негативной сывороткой. 
По результатам агглютинации судят о принадлежности исследуемой культуры иерсиний к тому или 
иному серовару.


                    СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИЕРСИНИОЗА

        Для исследования сывороток кроВИ живОтных на иерсиниоз используют развернутую РА 
в бактериологических пробирках или пробирках Флоринского. Реакцию ставят в четырех 
разведениях сыворотки в карбалинизированном (0,5%) физиологическом растворе (1:50, 1:100, 
1:200, 1:400) в объеме 0,5 мл. После добавления в каждую пробирку с сывороткой по 0,5 мл 
антигена в рабочем разведении получают разведения сывороток соответственно 1:100, 1:200, 
1:400, 1:800. Штативы с пробирками осторожно встряхивают для смешивания антигена с сыворот-
кой и помещают в термостат при температуре 37°С на 16-18 ч. По истечении указанного времени 
штативы выдерживают еще в течение 3 ч при комнатной температуре, затем проводят учет и 
оценку реакции.
        Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:100 
с оценкой не менее чем на 2 креста (+ +). За положительную реакцию принимают наличие 
агглютинации, начиная с разведения сыворотки 1:200, с оценкой не менее чем на 2 креста 
(+ +) и выше.
        Иерсиниозные антигены для РА биопромышленностью не выпускаются, но их можно получить 
в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики бруцеллеза ВНИИ экспериментальной 
ветеринарии.
        Для проведения дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза по результатам 
выполненных исследований может быть использована схема, представленная на рисунке 2.

 
                     ПРОФИЛАКТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА И ИЕРСИНИОЗА
                         И ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ

        Для эффективной профилактики бруцеллеза и иерсиниоза необходимо планомерно осуществлять 
комплекс мероприятий, направленных на создание высокой санитарной культуры ведения 
животноводства, недопущение заноса возбудителей в стада и обеспечение их благополучия.
        Профилактику бруцеллеза и противобруцеллезные мероприятия при установлении его у 
крупного рогатого скота в ранее благополучных районах проводят согласно Инструкции о меро-
приятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных и рекомендаций «Научно обоснованная 
система противобруцеллезных мероприятий в Нечерноземной зоне РСФСР».
        С целью предупреждения инфицирования скота иерсиниями следует тщательно контролировать 
качество кормов, соблюдать ветеринарно-санитарные правила по сбору и использованию навоза 
и нечистот.
        При возникновении диареи, маститов, появлении серологических реакций с бруцеллезными 
антигенами проводят бактериологические исследования на иерсиниоз. В случае обнаружения 
возбудителя больных животных изолируют, а в животноводческих помещениях проводят дезинфекцию. 
Для дезинфекции могут быть использованы раствор хлорной извести, содержащий не менее 2% 
активного хлора, 3%-ный раствор едкого натра при температуре не ниже 40°С, 20%-ная взвесь 
свежегашеной извести.
        Истощенных заболеванием животных убивают и при наличии изменений в мышцах туши 
утилизируют. Туши нормальной упитанности и без видимых изменений выпускают без ограничения, 
однако пораженные внутренние органы бракуют.
        В процессе убоя здоровых животных и обработки туш следует строго соблюдать ветеринарно-
санитарные правила.
        Эффективной мерой по предупреждению размножения иерсиний в мясе является быстрое 
охлаждение и замораживание туш до температуры - 18 град. С и ниже. В процессе хранения мяса 
необходимо строгий контроль температурно-влажностного режима в морозильных камерах, 
недопущение размораживания мяса до его поступления в торговую сеть или предприятия 
общественного питания.

                   СОСТАВ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

        Буферная среда обогащения для иерсиний (среда Ющенко). Состав: натрия хлорид (NаСl) - 
8,5 г; 1/15 М раствор натрия гидрофосфата (Nа2НРО4*12Н20)- 3 мл; 1/15 М раствор калия 
дигидрофосфата (КН2РО4) - 7; вода дистиллированная - 990 мл.
        Приготовление. Предварительно готовят по 100 мл 1/15 М растворов указанных солей и 
изотонический раствор натрия хлорида. Затем к изотоническому раствору добавляют указанное 
количество приготовленных растворов фосфатов, смешивают, фильтруют, разливают в пробирки 
(или в другие емкости) по 5-6 мл и стерилизуют при температуре 115 град. С в течение 10 
или 30 мин. текучим паром; рН среды- 7,2.
        Мясо-пептонный агар (МПА). Состав: водопроводная вода - 500 мл; мясная вода - 500 мл;
пептон - 10 г; натрий хлористый - 5, агар-агар - 25 г.
        Приготовление. Осаждают раствор яичным белком (1 белок на 1 л), фильтруют через ватно-
марлевый фильтр. Автоклавируют при температуре 115 град. С в течение 30 мин; рН среды до 
стерилизации - 7,7.
        Среда с мочевиной по Преусу в модификации ЦНИИВС им. Мечникова. Состав: бульон 
Хоттингера - 100 мл; агар - 15 г; глюкоза - 5 г; 50%-ный водный раствор мочевины - 20 мл; 
0,2%-ный водный раствор бромтимолового синего- 12 мл.
        Принцип действия. Бактерии, обладающие ферментом уреазой, расщепляя мочевину, подщела-
чивают среду, которая вследствие изменения цвета индикатора рН бромтимолового синего из 
оливковой становится синей. Уреазоотрицательные бактерии, сбраживая глюкозу, сдвигают рН 
в кислую сторону, и срда приобретает желтый цвет. Результаты учитывают через 24 и 48 ч.
        Приготовление. Агар расплавляют в бульоне Хоттингера при подогревании, фильтруют, 
устанавливают рН 6,9-7,0. Стерилизуют при температуре 121°С в течение 20 мин. К стерильному 
питательному агару добавляют глюкозу, растворы мочевины и бромтимолового синего в стериль-
ной воде. Стерилизуют текучим паром однократно в течение 15 мин, после чего устанавливают 
емкость со средой в скошенном положении.
        Среда с мочевиной по Кристенсену. Состав: пептон - 1 г; натрия хлорид (NaCl) - 5; 
калия дигидрофосфат (КH2РО4)- 2; агар - 20; глюкоза - 1 г; 0,2%-ный раствор фенолового 
красного в 50%-ном этиловом спирте - 6 мл; 50%-ный водный раствор мочевины - 40 мл, вода 
дистиллированная - 1000 мл.
        Принцип действия тот же, что и среды Преуса. Изменение рН улавливается с помощью 
индикатора фенолового красного (среда из желтоватой становится красной в срок от
нескольких часов до 4 суток).
        Приготовление. Готовят 50%-ный водный раствор мочевины и выдерживают его в течение 
2-3 суток для самостерилизации. Пептон, соли и агар растворяют при нагревании, устанав-
ливают рН 6,8-6,9 (особо точно), фильтруют и стерилизуют при температуре 115°С в течение
20 мин. Затем добавляют глюкозу в спиртовой раствор фенолового красного, стерилизуют 
текучим паром в течение 1 ч и охлаждают до температурд 50-55 град. С. Раствор мочевины с 
соблюдением правил асептики добавляют к основе. Готовую среду также асептически разливают 
в стерильные пробирки и охлаждают в скошенном положении.
        Среда для определения подвижности бактерий. Состав: натрия хлорид (NаСl) - 5 г; 
гидролизат Хоттингера - 120-150 мл; агар - 3-4 г; вода дистиллированная - до 1000 мл.
        Приготовление. Гидролизат Хоттингера разводят водой до содержания в среде 1,3-1,4%
аминного азота, добавляют натрия хлорид, устанавливают рН 7,2-7,4, добавляют агар и 
полностью растворяют его, подогревая воду при постоянном помешивании. Затем раствор 
фильтруют в горячем состоянии через миткалевый фильтр, проверяют прозрачность (визуально) 
и при необходимости освобождают от мути отстаиванием в узких сосудах или просветляют
взбитым белком из свежих яиц. Для этой цели белок двух куриных яиц хорошо размешивают с 
двойным объемом холодной воды и вносят в среду, которую затем нагревают в кипящей водяной 
бане или в автоклаве текучим паром в течение 20 мин до свертывания белка. После этого 
горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают по 5 мл в стерильные пробирки. 
Стерилизуют среду при температуре 121°С в течение 30 мин. Готовый полужидкий агар охлаждают 
в виде столбика. Среда должна быть севершенно прозрачной.
        Среда для определения индолообраювания. Состав: бульон из триптического перевара 
казеина (1,2-1,4% аминного азота), содержащий 0,5% хлоридов.
        Принцип действия. Среда, содержащая аминокислоту триптофан, служит питательной 
основой для размножения бактерий. Обладающие ферментом триптофаназой бактерии расщепляют 
триптофан, образуя индол, пировиноградную кислоту и аммиак. При добавлении к 24-48-часовой
культуре реактива образовавшийся индол вступает с ним в реакцию, окрашиваясь в розовый или
красный цвет.
        Приготовление. Триптический перевар предварительно проверяют на содержание триптофана 
и отсутствие индола, устанавливают рН 7,3-7,4, разливают в пробирки по 4-5 мл и стерилизуют 
при температуре 121°С в течение 15 мин. Для той же цели можно использовать бульон Хоттингера. 
        Тест-реактивы на индол:
        реактив Эрлиха. Состав: парадиметиламинобензальдегид - 1 г; спирт этиловый 96°-ный -
95 мл; кислота хлористоводородная концентрироаанная (HСl)- 20 мл. Приготовление: растворяют 
альдегид в спирте и добавляют кислоту. Хранят реактив в темном месте; 
        реактив Ковача. Состав: парадиметиламинобензальдегид - 5 г; спирт амиловый - 75 мл; 
кислота хлористоводородная концентрированная (НС1) - 25 мл. Приготовление: растворяют 
альдегид в спирте при легком нагревании (в водяной бане при температуре 50-55 град. С, 
охлаждают и добавляют в раствор кислоту. Готовый реактив должен быть желтого цвета; хранят
в темном месте при температуре 4 град. С. 
        Среда с феинлаланином. Состав: дрожжевой экстракт жидкий - 100 мл или сухой - 3 г, 
натрия хлорид (NаС1)- 5 г, натрия гидрофосфат (Na2НРО4) - 1 г; а-фенилаланин - 1 г или 
Д а-фенилаланин - 2 г; агар - 12 г; дистиллированная вода - 1000 мл. 
        Принцип действия основан на способности бактерий рода Proteus и некоторых штаммов 
бактерий рода Erwinia расщеплять аминокислоту фенилаланин. В результате реакции образуются 
аммиак и фенилпировиноградная кислота. Кислота бесцветна. Для ее обнаружения применяют 
реактив, содержащий хлорид железа (III). Присоединяясь к фенилпировиноградной кислоте, 
он вызывает темно-синее окрашивание среды.
        Приготовление. Дрожжевой экстракт вносят в холодную воду и подогревают. Затем 
последовательно добавляют остальные ингредиенты среды, кипятят ее до полного расплавления 
агара (5-10 мин), фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают по 2-3 мл в агглютина-
ционные пробирки. Реакция среды должна быть в пределах рН 7,0-7,2 (без подтитровки). 
Стерилизуют ее при температуре 112°С в течение 30 мин и охлаждают, придав пробиркам скошен-
ное положение. Готовая среда бесцветна.
        Тест-реактив представляет собой 10%-ный водный раствор хлорида железа (III) (FеСl3).
Хранят его при температуре 4-6°С в темном месте.
        Цитратный агар Симонса. Состав: натрия хлорид (NаС1) - 5 г; магния сульфат 
(MgSO4*7H2O) - 0,2; аммония дигидрофосфат (NH4*Н2РО4) - 1; калия гидрофосфат (К2НРО4)-
1; натрия цитрат - 3 г; 0,2%-ный водный раствор бромтимолового синего - 40 мл; агар - 20 г;
вода дистиллированная - 1000 мл. Аммония дигидрофосфат может быть заменен на аммония 
гидрофосфат (NH4)2НРО4 или на натрия-аммония гидрофосфат (NaNН4НРО4), взятые по 1,5 г на 1 л 
среды. В этих случаях калия гидрофосфат заменяют тем же количеством калия дигидрофосфата
(КН2РО4).
        Принцип действия. Бактерии, обладающие сосутветствующими ферментами (цитратазой и др.), 
способны развиваться, используя в качестве единственного источника углерода входящий в 
состав среды цитрат. При реакции расщепления цитрата одним из конечных продуктов является
двуокись углерода (СО2), вступающая далее во взаимодействие с водой и ионами натрия, в 
результате чего образуется натрия карбонат (Nа2СОз), сдвигающий рН среды в щелочную сторону.
        В результате указанных метаболических реакций вегетирующие бактерии изменяют 
оливковый цвет среды на ярко-синий. Энтеробактерии, не обладающие способностью утилизировать 
цитрат в качестве единственного источника углерода, на среде Симонса не растут, поэтому 
цвет среды остается без изменения.
        Приготовление. Предварительно тщательно отмытый агар расплавляют при подогревании 
в свежеприготовленной дистиллированной воде. Все соли сначала растворяют в небольшом 
объеме воды, а затем раствор добавляют к расплавленному агару и доводят до объема 1000 мл.
Устанавливают рН 7,2, добавляют раствор индикатора, хорошо перемешивают и разливают в 
пробирки по 5-7 мл. При охлаждении пробирки устанавливают в скошенном положении, оставляя 
столбик в 2-2,5 см.
        Среды с аминокислотами - лизином, орнитином, аргинином. Состав: мясная вода - 400 мл;
пептон - 5 г; глюкоза - 1 г; вода дистиллированная - 600 мл; 1,6%-ный спиртовой раствор 
бромкрезолового пурпурного - 0,6 мл; 0,1%-ный спиртовой раствор крезолового красного - 5 мл;
а-аминокислота - 10 г или Д а-аминокислота - 20 г.
        Принцип действия. Бактерии, обладающие специфическими декарбоксилирующими энзимами, 
расщепляют аминокислоты в их карбоксильных концевых группах (-СООН), образуя амин или 
диамин (кадаверин из лизина, путресцин из орнитина и аргинина) и двуокись углерода (СО2);
изменяя тем самым рН среды в щелочную сторону. При расщеплении аргинина образуется, 
кроме того, аммиак. Амины и диамины остаются стабильными, если реакция происходит в 
анаэробных условиях (с этой целью в пробирки после посева культур добавляют стерильное 
вазелиновое масло). Бактерии используют левовращающие изомеры аминокислот.
        В среды с аминокислотами входит глюкоза, которую все энтеробактерии ферментируют 
в первые часы, снижая рН, вследствие чего содержимое пробирок с аминокислотами и конт-
рольной пробирки (без аминокислот) желтеет. Через 24 ч инкубации и позднее (до 4 суток) 
при расщеплении аминокислот происходите подщелачивание сред, которые становятся фиолетовыми. 
Цвет контрольной среды остается желтым.
        Приготовление. В мясной воде растворяют пептон и глюкозу. Устанавливают рН 6,0-6,1. 
Среду делят на четыре части. Впервые три порции среды вносят по одной из аминокислот 
(лизин, орнитин, аргинин). В последнюю порцию питательной основы ни одной из аминокислот 
не добавляют, оставляя ее в качестве контрольной. Среды кипятят в течение 5-10 мин и вновь 
устанавливают рН 6,0-6,1. Во все порции вносят растворы индикаторов, перемешивают и раз-
ливают в стерильные пробирки по 2-3 мл. Стерилизуют среды при температуре 110°С в течение 
30 мин.
        Среды Кларка. Состав: пептон - 5 г; калия гидрофосфат (К2НРО4) - 5 г; глюкоза - 5 г;
вода дистиллированная - 1000 мл.
        Принцип действия. Среда Кларка представляет собой буферный глюкозопептонный бульон, 
используемый для выращивания бактерий при постановке реакций с метиловым красным и 
Фогес-Проскауэра. Культуру выращивают в течение 2-5 суток.
        В реакции с метиловым красным определяют степень ферментации глюкозы с образованием 
смеси кислот (молочной, уксусной, муравьиной и др.), подкисляющих среду до рН 4,0-5,0. В 
этом случае среда с выращенной культурой после добавления реактива из бесцветной становится
ярко-красной (положительная реакция). Если же кислотообразование будет слабым и значение 
рН окажется около 6,0-7,0, то среда станет желтой.
        В реакции Фогес-Проскауэра определяют наличие ацетона (ацетилметилкарбинола), 
являющегося промежуточным продуктом при расщеплении глюкозы некоторыми энтеробактериями. К 
4-5-суточной культуре добавляют сначала а-нафтол, затем раствор едкого кали и хорошо 
встряхивают пробирку для лучшего доступа кислорода. Указанный порядок добавления реактивов 
обязателен. Происходит реакция окисления ацетона в присутствии щелочи и а-нафтола. При 
положительной реакции возникает красное окрашивание среды.
        Приготовление. Ингредиенты растворяют в воде, раствор кипятят в течение 2-3 мин, 
фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 6,0-7,0 и разливают в пробирки по 
2-2,5 мл. Стерилизуют при температуре 112°С в течение 20 мин текучим паром или в течение 
3 дней по 20 мин.
        Тест-реактивы:
        для реакции с метиловым красным. Состав: метиловый красный - 0,1 г; спирт этиловый 
96°-ный - 300 мл; вода дистиллированная - 200 мл. Приготовление: краску растворяют в спирте, 
затем добавляют воду. Для проведения реакции к 2-2,5 мл испытуемой культуры добавляют 
5-6 капель реактива;
        для реакции Фогес-Проскауэра. Состав: реактив №1 - 6%-ный спиртовой раствор а-нафтола; 
реактив №2 - 40%-ный водный раствор едкого кали (КОН). Приготовление: к 2-2,5 мл культуры 
добавляют 1 мл раствора а-нафтола, а затем - 0,4 мл 40%-ного едкого кали.
        Среда с углеводами Гисса. Состав: пептон - 10 г; натрия хлорид (NаС1) - 5 г; индикатор 
Андреде - 10 мл; углевод - 5 или 10 г; вода дистиллированная - 1000 мл. К средам может 
быть добавлен агар в количестве 0,2-0,4%. Пептоны, входящие в основу углеводных сред, долж-
ны быть свободны от углеводов.
        Принцип действия в общих чертах основан на ферментации углевода, т. е. на анаэробном 
процессе, при котором расщепление исходного углевода происходит путем первичного 
фосфорилирования до образования соединения глюкоза-6-фосфат, из которого в конечном итоге 
образуются различные кислоты, спирты, альдегиды и газообразные вещества (водород и двуокись 
углерода). При этом рН среды изменяется в кислую сторону.
        Приготовление. Пептон (а для приготовления полужидких сред и агар) растворяют в воде 
при подогревании, добавляют натрия хлорид и индикатор, фильтруют, устанавливают рН 7,1-7,2 
и стерилизуют при температуре 121°С в течение 12 мин. К стерильной основе добавляют
соответствующий углевод в количестве: рамнозу, ксилозу, мальтозу, арабинозу, салицин, 
трегалозу, рафинозу, целлобиозу, дульцит, сорбит, адонит или глицеоин -по 0,5%, лактозу, 
глюкозу, маннит или сахарозу - по 1% (лактозу в некоторых случаях добавляют в количестве 
2-10%). Разливают среду в стерильные пробирки по 3-4 мл, в пробирки с глюкозой помещают 
поплавки. Стерилизуют при температуре 110°С в течение 30 мин.