МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (Минсельхозпрод россии) ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ УТВЕРЖДАЮ Заместитель руководителя 10.06.99г. № 13-4-2/1632 Департамента ветеринарии В.В.Селиверстов МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по диагностике критидиоза шмелей 1. Общие положения 1.1. Критидиоз - болезнь рабочих особей шмелей, вызываемая жгутиковым простейшим Crithidia bombi, которые прикрепляются к эпителию тонкой и задней кишок или находятся в просвете кишечника. Паразита обнаруживают в пищеварительном тракте маток и самцов шмелей. Заражение происходит при заглатывании насекомыми цист паразита, выделяемых с калом инфицированной маткой или контактах с загрязненной поверхностью при нарушениях санитарных правил содержания шмелей. Болезнь характеризуется снижением опылительной деятельности рабочих шмелей, развитием у них яичников, появлением в гнезде нескольких неоплодотворенных маток, дающих в потомстве самцов. Возможна гибель плодной матки. 1.2. Диагноз на критидиоз ставят на основании отмеченных признаков болезни при обнаружении паразитов в фекалиях и кишечнике насекомых. 1.3. Для диагностики в лабораторию направляют собранные в течение 2-3 суток фекалии маток, а также живых шмелей (2-3 рабочие особи) или свежие (не более 1 суток с момента гибели) трупы в чистых сухих стеклянных флаконах, пробирках или картонных коробках. 2. Лабораторные исследования 2.1. Обездвиженных живых или погибших шмелей кладут спинкой вниз, глазными ножницами делают разрез по средней линии брюшка и осторожно пинцетом извлекают кишечник. Его помещают в каплю воды на предметное стекло. Препаровальной иглой отделяют мальпигиевы сосуды, вырезают участок кишечника между задней частью средней кишки и передней частью задней кишки. 2.2. Вырезанный участок кишечника вместе с его содержимым или кусочек кала помещают в каплю воды на чистое обезжиренное стекло, разбивают препаровальной иглой, полученную суспензию накрывают покровным стеклом и микроскопируют (окуляр х 10, объектив х 40) в затемненном поле зрения. Обнаруживают подвижные (хоаномастиготные) и неподвижные (амастиготные) овальные или округлые формы паразита. 2.3. Окончательный диагноз ставят по результатам микроскопии окрашенных препаратов. Каплю суспензии равномерно распределяют по поверхности предметного стекла. Мазок сушат, фиксируют в спирт-эфире 15-20 минут и красят 0,25% раствором краски Гимза 14-16 часов. Окрашенные мазки промывают водопроводной водой, сушат и микроскопируют под иммерсионной системой микроскопа. Обнаруживают овальные, грушевидные, размером 5-8 х 2,1-3,2 мкм клетки с трубковидным или воронкообразным углублением на переднем конце с выходящим из него жгутиком (7-12 мкм). Протоплазма клетки паразита голубого цвета, центрально или ближе к заднему концу расположено округлое, темно-фиолетовое ядро (1,2-1,3 мкм) и рядом с ним бобовидный красного цвета кинетопласт (0,5-1,0 мкм). Неподвижные формы лишены жгутика, имеют размер 3,8-5,5 х 1,4-2,0 мкм, ядро расположено центрально, кинетопласт окрашен менее интенсивно, чем у подвижных форм. Цисты округлые (1,7 мкм), покрыты толстой оболочкой, имеют ядро и кинетопласт. Методические указания разработаны лабораторией профилактики болезней и экологической охраны пчел Всероссийского научно- исследовательского института экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ).