МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ 
             ПО ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ 
                 ПРИОННЫХ ИНФЕКЦИЙ ЖИВОТНЫХ


 
1.Общие положения
2.Патогистологическое иследование



Приложение
Скрепи овец и коз.

Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота.

Трансмиссивная энцефалопатия норок.













    МИНИСТЕРСТВО                      
 СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА 
   И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ                            УТВЕРЖДАЮ
 РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ                          Начальник
(Минсельхозпрод России)                  Департамента ветеринарии  
                                               В.М.Авилов
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ                      

06.05.97г. № 13-7-2/939

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по патогистологической диаг-
ностике прионных инфекций
животных

1. Общие положения

1.1. Прионные инфекции - медленно прогрессирующие болезни овец
и коз (скрепи), крупного рогатого скота (губкообразная энцефалопа-
тия), норок (трансмиссивная энцефалопатия), протекающие с симпто-
мами поражения центральной нервной системы и развитием в головном
мозге изменений, характерных для губкообразной энцефалопатии.

Возбудитель болезни - инфекционный белок "прион" - специфичес-
кий сиалогликопротеин, образующий в головном мозге бляшки скрепи-
ассоциированных фибрилл, отличается чрезвычайно высокой устойчи-
востью к действию физических и химических факторов.

1.2. Диагностика указанных инфекций основана на гистологичес-
ком исследовании головного мозга животных, имевших при жизни симп-
томы поражения центральней нервной системы и убитых в терминальной
стадии болезни.

1.3. При подозрении на прионные инфекции в ветеринарную лабора-
торию направляют головной мозг овец, коз и норок - целиком, круп-
ного рогатого скота при первичной постановке диагноза - целиком,
из неблагополучных по губкообразной энцефалопатии хозяйств - мож-
но только стволовую часть (обязательно ромбовидный и средний мозг).

1.4. Головной мозг овец, коз, крупного рогатого скота или норок
сразу же после извлечения из полости черепа непосредственно в хо-
зяйстве или на мясокомбинате фиксируют в 10%-ном солевом растворе
формалина, который готовят по следующей прописи: 8,5 г поваренной
соли растворяют в 900 мл дистилированной воды, затем добавляют
100 мл формалина, содержащего 40% формальдегида. Объем солевого
раствора формалина должен в 10 раз превышать объем фиксируемого
головного мозга. Фиксацию головного мозга проводят в течение 14
суток со сменой фиксатора через неделю.

2. Патогистологическое исследование

2.1. Для гистологичечкого исследования вырезают поперечные ку-
сочки толщиной 0,3 - 0,5 см из следующих отделов головного мозга:

- на скрепи овец и коз - из продолговатого мозга (каудальная,
средняя и краниальная части), варолиевого моста, четверохолмия,
одновременно для исключения висны - дополнительно из коры голов-
ного мозга (свод боковых желудочков) - рис. 1;

- на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота - из
продолговатого мозга (области задвижки и задних ножек мозжечка),
среднего мозга (область ростральных холмов) - рис. 2 и 3;

- на трансмиссивную энцефалопатию норок - из коры головного
мозга (свод боковых желудочков), аммонова рога, варолиевого мос-
та и ножек мозжечка.

2.2. Вырезанные кусочки головного мозга дополнительно фиксиру-
ют в течение суток в аналогичном солевом растворе формалина, уп-
лотняют в целлоидине или парафине, после чего готовят гистологи-
ческие срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином.

2.3. При заболевании животных прионными инфекциями в гистопре-
паратах головного мозга обнаруживают следующие патогистологичес-
кие изменения:

- скрепи овец и коз - дистрофические изменения нервных клеток,
из которых диагностическое значение имеет массовая вакуолизация
цитоплазмы нейронов, реже - гипертрофию и пролиферацию астроци-
тов, вакуолизацию серого вещества;

- губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота - вакуо-
лизацию серого вещества, реже цитоплазмы нервных клеток, гипер-
трофию и пролиферацию астроцитов;

- трансмиссивная энцефалопатия норок - дистрофию, в том числе
вакуолизацию цитоплазмы нейронов, гипертрофию и пролиферацию ас-
троцитов, вакуолизацию серого вещества.

2.4. Диагноз на прионные инфекции при наличии характерных
клинике-эпизоотологических данных ставят в случае обнаружения:

- скрепи овец и коз - не менее 15 вакуолизированных нервных
клеток в одном или не менее 20 в двух - трех гистопрепаратах;

- губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота - вакуо-
лизации серого вещества (в отличии от скрепи имеет основное диаг-
ностическое значение) головного мозга или цитоплазмы нейронов;

- трансмиссивная энцефалопатия норок - не менее 20 вакуелизи-
рованных нервных клеток в одном гистопрепарате головного мозга.

2.5. Прионные инфекции необходимо дифференцировать:

- скрепи овец и коз - от висни, листериоза (нервная форма),
бешенства, болезни Ауески, отравлений различными веществами, а
при наличии симптома зуда - от трихофитии, стрептотрихоза, дема-
декоза, чесотки;

- губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота - от
листериоза, бешенства, болезни Ауески, инфекционного ринотрахеи-
та (нервная форма), злокачественной катаральной горячки, губкооб-
разности белого вещества головного мозга неизвестной этиологии,
а также отравлений различными веществами;

- трансмиссивную энцефалопатию норок - от алеутской болезни,
самопогрызания, бешенства.

2.6. Срок исследования - не более 25 суток со дня начала фик-
сации головного мозга животного.

С утверждением настоящих Методических указаний на территории
Российской Федерации не действуют Временные методические указания
по патогистологическим исследованиям на скрепи овец и коз, утвер-
жденные Главветупром Госагропрома СССР 17.01.87  № 432-5.



ПРИЛОЖЕНИЕ
к "Методическим указаниям по
патогистологической диагнос-
тике прионных инфекций живот-
ных"

от "06" мая 1997 г.

№13-7-2/939

                          Скрепи овец и коз.

Клинико-эпизоотологические данные. Длительный инкубационный
период (не менее 9 месяцев). Заболевают только взрослые животные,
чаще в возрасте от 1 до 4 лет. Симптомы поражения центральной
нервной системы. Длительная клинико-морфологическая стадия болез-
ни (не менее 4 - 6 нед , обычно несколько месяцев, редко до года).
Отсутствие повышение температуры тела. Постепенное и постоянное
выделение больных животных. 100% летальность. Избирательное пора-
жение головного и спинного мозга. В естественных условиях узкий
круг восприимчивых животных.

Ведущим наиболее характерным и постоянным симптомом при скре-
пи является атаксия: в начале болезни - неуверенные, некоординиро-
ванные движения, спотыкания во время ходьбы; позднее - слабость
конечностей, чаще тазовых, что обуславливает отклонение в стороны
задней части туловища при ходьбе и падение при беге. По мере раз-
вития болезни передвижение больных животных все более затрудненно,
овцы часто падают не только при беге, но и при ходьбе, долго ле-
жат, поднимаются с большим трудом. К исходу болезни может разви-
ваться парез и паралич конечностей, чаще тазовых.

Для ранней стадии болезни характерны беспокойство и пугливость
животных. У больных животных отмечают частое переступание конеч-
ностями, настороженность и неподвижность взгляда, сменяющиеся
резкими движениями глазного яблока, скрежет зубами. У некоторых
животных можно наблюдать частичную или полную потерю зрения, нап-
ряженность и дрожание мышц шеи, дрожание губ, кивание, иногда
кручение головой.

При некоторых энзоотиях скрепи одним из ведущих симптомов яв-
ляется зуд и, как следствие его, участки облысения, расчесы и по-
грызы кожи, чаще наблюдаемые в области головы, шеи, спины, бедер,
основания хвоста.

Аппетит и упитанность у больных животных сохраняются длитель-
ное время. В конечной стадии болезни развивается истощение живот-
ных.

На основании клинико-эпизоотологических данных можно поставить
диагноз на медленные инфекции, но без дифференцировки на скрепи и
висну.

Патологоанатомические изменения. У животных, больных скрепи,
при наличии при жизни симптома зуда обнаруживают участки облысе-
ния и повреждения кожи. В терминальной стадии болезни отмечают
атрофию скелетной мускулатуры. Редко выявляют гиперемию сосудов
мягкой оболочки головного мозга.

Патогистологические изменения. Для скрепи характерны альтера-
тивные изменения при отсутствии воспалительных, симметричность
поражений в головном мозге, губкообразность серого вещества го-
ловного мозга, пролиферация астроцитарной глин. Альтеративные из-
менения можно условно разделить на "специфические" и "неспецифи-
ческие".

К "специфическим" изменениям, имеющим диагностическое значение,
относят массовую вакуолизацию нейронов, заканчивающуюся лизисом
(выпадением) нервных клеток. Наиболее типичны однокамерные вакуо-
ли, занимающие все или почти все тело нейрона. Реже встречают мно-
гокамерные вакуоли.

"Неспецифические" изменения представлены острым набуханием
нервных клеток, очаговым или диффузным распылением хроматофильно-
го вещества, хроматолизом, неравномерным гиперхроматозом и пикно-
морфностью нейронов; набуханием, пикноморфностью, лизисом и экто-
пией их ядер.

Основные альтеративные изменения, в том числе и вакуолизиро-
ванные нервные клетки, при скрепи локализуются преимущественно в
продолговатом мозге и варолиевом мосту на уровне корешков У1 -
ХП пар черепномозговых нервов.

Диагноз на скрепи ставят на основании данных гистологического
исследования с обязательным учетом клинико-эпизоотологических
данных, характерных для медленных инфекций.

Дифференциальная диагностика. Скрепи необходимо дифференциро-
вать от висны, листериоза (нервная форма), бешенства, болезни
Ауески, отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, кар-
боматными, ртутьорганическими соединениями, фосфидом цинка, мы-
шьяком, поваренной солью, а при наличии симптома зуда - от трихо-
фитии, стрептотрихоза, демадекоза, чесотки.

Дифференциальная диагностика скрепи и висны не представляет
трудностей. Не смотря на наличие во многом сходных для обеих бо-
лезней клинико-эпизоотологических данных, гистологически при
скрепи в головном мозге обнаруживают альтеративные изменения, в
том числе вакуолизацию нейронов, в то время как для висни харак-
терны воспалительные изменения, в виде негнойного демиелинизиру-
ющего менингоэнцефалита.

Для нервной формы листериоза характерны: короткий инкубацион-
ный период, болеют овцы всех возрастов, но ягнята в более тяжелой
форме, острое течение, повышение температуры тела, быстрое рас-
пространение болезни в хозяйстве, выделение возбудителя болезни -
Listeria monocytogens. Гистологически в головном мозге выявляют
изменения, характерные для гнойного воспаления.

При бешенстве обнаруживают дессиминированный негнойный энцефа-
ломиелит, а также тельца Негри в цитоплазме нервных клеток. Ост-
рый негнойнюй менингоэнцефалит характерен для болезни Ауески.
Эти болезни имеют короткий инкубационный период, острое течение.
Болезнь Ауески быстро распространяется в отаре. Заболевают живот-
ные всех возрастов.

Для отравлений животных вышеуказанными веществами характерны
симптомы поражения центральной нервной системы: возбуждение, сме-
няющееся угнетением, клонические и тонические судороги, мышечная

дрожь, ослабление рефлексов, сужение или расширение зрачка, атак-
сия, парез и паралич конечностей.

При этом обычно одновременно отмечают симптомы поражения орга-
нов пищеварения (затрудненное глотание, диарею, реже запор и тим-
панию), ослабление сердечной деятельности; при некоторых отравле-
ниях - частое мочеиспускание. Течение отравлений, сопровождающих-
ся поражением центральной нервной системы, острое или подострое,
болеют животные всех возрастов, заболевание ограничено во време-
ни, нередко выделяется большое количество больных в короткий от-
резок времени.

Гистологически в головном мозге (нередко и в спинном) обнару-
живают расстройство гемодинамики (повышенное кровенаполнение со-
судов, серозно-фибринозный отек их стенок, периваскулярные отеки,
отек мозгового вещества), дистрофию нейронов (при некоторых от-
равлениях их вакуолизацию), гибель нервных клеток с их распадом
и образованием клеток-теней, демиелинизацию мозгового вещества,
очаговые некрозы.

При трихофитии, стрептотрихозе, демадекозе, чесотке изменения
ограничиваются поражением кожи, при этом выделяют соответствующих
возбудителей.

       Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота.

Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период при
губкообразной энцефалопатии длительный (не менее 20 месяцев).
Симптомы болезни проявляются только у взрослых животных (от 20 ме-
сяцев до 11 лет). Клинического проявления болезни у телят не от-
мечают, но они могут быть инфицированы возбудителем губкообразной
энцефалопатии.

Для болезни характерны симптомы поражения центральной нервной
системы: испуг, стремление к уединению, животное стоит с опущен-
ной головой, часто упираясь ею в стену, спина дугообразно изогну-
та, при движении, наоборот, позвоночник вогнут; повышенная возбу-
димость, агрессивность, проявляющаяся боданием, ляганием, иногда
клиникой бешенства; неадекватная реакция на прикосновение, шум
(испуг, падение, мышечная дрожь, мигание, лягание); беспорядочное
движение головой, трутся или бьются ею о стену; атаксия тазовых и
грудных конечностей, провляющаяся неуверенной походкой, падением,
особенно при беге и резких поворотах, бегом, похожим на бег рыса-
ка, животное после падения поднимается с трудом; тремор, редко
миоклонические судороги, могут сокращаться отдельные группы воло-
кон мышцы, мышечная дрожь нижней части шеи, подгрудка, области
плеча, реже других частей тела; обвислость или неправильное поло-
жение ушей (напрвлены вперед или назад), может быть поднята верх-
няя губа, ноздри расширены, чихание, фырканье, частое облизывание
носового зеркальца, скрежет зубами. Указанные симптомы могут на-
блюдаться в разных сочетаниях и с различной степенью выраженности.

Повышение температуры тела не отмечают. Болезнь всегда прогрес-
сирует и заканчивается петельно. Длительность клинико-морфологи-
ческой стадии болезни от одного до пяти месяцев и больше. Могут
быть отдельные случаи ремиссии.

Патологоанатомические изменения. Ни вскрытии видимые изменения
отсутствуют.

Патогистологические изменения. Ведущее место среди изменений
в головном мозге занимает вакуолизация серого вещества. Вакуоли-
зация цитоплазмы нейронов встречается реже, чем при скрепи овец.
Имеют место и другие виды дистрофий нервных клеток, но они само-
стоятельного значения в диагностике болезни не имеют.

Диагноз. Диагноз на губкообразную энцефалопатию крупного рогато-
го скота ставят на основании результатов гистологического исследо-
вания с обязательным учетом клинико-эпизоотологических данных, ха-
рактерных для этой болезни.

Дифференциальный диагноз. Губкообразную энцефалопатию необходи-
мо дифференцировать от листериоза, бешенства, болезни Ауески, нер-
вной формы инфекционного ринотрахеита, злокачественной катараль-
ной горячки, губкообразности белого вещества неизвестной этиологий,
а также отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, ртуть-
органическими, карбоматными соединениями, фосфидом цинка, мышьяком,
поваренной солью.

Дифференциация от листериоза, бешенства, болезни Ауески основа-
на на показателях, описанных при скрепи овец, за исключением более
медленного распространения листериоза в стаде.

Нервной формой инфекционного ринотрахеита болеют только телята,
инкубационный период болезни короткий, течение острое, для гнете-
картины характерен острый негнойный менингоэнцефалит.

При злокачественной катаральной горячке инкубационный период
от нескольких недель до нескольких месяцев, течение болезни чаще
острое или подострое, болеет только взрослый скот (4 - 5 лет и
старше), больные животные выделяются постепенно. Из гистологичес-
ких изменений отмечают негнойный менингоэнцефалит с серозно- фиб-
ринозными периваскулитами.

При губкообразности белого вещества головного мозга вакуоли на-
ходят не в сером, а в белом веществе. Этиология болезни не извест-
на.

                Трансмиссивная энцефалопатия норок.

Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период не ме-
нее 8 месяцев. Болеют взрослые животные, в возрасте одного года и
старше. Для болезни характерны симптомы поражения центральной -
нервной системы: повышенная возбудимость, бесцельное бегание в
клетке, неуверенная, шаткая, скованная походка, отрывистые резкие
движения тазовыми конечностями. Хвост располагается поверх спины.
Животные часто кусают его, при этом двигаются по кругу. К ранним
симптомам относят исчезновение инстинкта поддержания чистоты
клетки, отсутствие заботы о щенках, затрудненное глотание. При
прогрессировании болезни характерно сильное истощение, животное
перестает двигаться, обычно сидит в полусонном состоянии в углу
клетки, вцепившись зубами в проводку. Отмечают легкий тремор, иног-
да судороги. Продолжительность болезни 3 - 6 недель. Температура
тела не повышается. Исход болезни летальный. Возможно бессимптом-
ное течение болезни, при котором отмечают периодический отказ от
корма, сильное угнетение, исхудание и смерть.

Патологоанатомические изменения почти отсутствуют. Отмечают ис-
тощение, исчезновение жировых депо в подкожной клетчатке, а также
анемию и отек головного мозга.

Патогистологические изменения. Для трансмиссивной энцефалопатии
норок характерны: вакуолизация мозгового вещества, дистрофия нерв-
ных клеток, пролиферация астроцитов. Устанавливают хроматолиз,
пикноморфность и склероз нервных клеток коры, стволовой части го-
ловного мозга и мозжечка. Наиболее характерны вакуолизация цито-
плазмы нейронов и серого вещества, которые выявляют преимущест-
венно в области свода боковых желудочков и в аммоновом роге.

Диагноз на трансмиссивную энцефалопатию норок ставят на основа-
нии обнаружения в головном мозге вакуолизации мозгового вещества,
дистрофии, в том числе вакуолизации нейронов, пролиферации астро-
цитарной глии.

Дифференциальный диагноз. Трансмиссивную энцефалопатию норок
необходимо дифференцировать от алеутской болезни, самопогрызания,
а также от бешенства (см. скрепи овец).

Алеутская болезнь протекает медленно и сопровождается сильным
истощением. При вскрытии устанавливают тяжелое поражение почек,
печени, селезенки, лимфатических узлов, желудка и тонкого кишеч-
ника, чего не отмечают при трансмиссивной энцефалопатии. Патогис-
тологически для алеутской болезни характерны периартерииты, в том
числе некротические, гломерулонефрит, плазмоклеточная реакция в
различных органах.

Самопогрызание обычно отмечают у щенков норок в возрасте 45
суток, при котором обнаруживают травмы кожи.