МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПРИОННЫХ ИНФЕКЦИЙ ЖИВОТНЫХ 1.Общие положения 2.Патогистологическое иследование Приложение Скрепи овец и коз. Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота. Трансмиссивная энцефалопатия норок. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ УТВЕРЖДАЮ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Начальник (Минсельхозпрод России) Департамента ветеринарии В.М.Авилов ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ 06.05.97г. № 13-7-2/939 МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по патогистологической диаг- ностике прионных инфекций животных 1. Общие положения 1.1. Прионные инфекции - медленно прогрессирующие болезни овец и коз (скрепи), крупного рогатого скота (губкообразная энцефалопа- тия), норок (трансмиссивная энцефалопатия), протекающие с симпто- мами поражения центральной нервной системы и развитием в головном мозге изменений, характерных для губкообразной энцефалопатии. Возбудитель болезни - инфекционный белок "прион" - специфичес- кий сиалогликопротеин, образующий в головном мозге бляшки скрепи- ассоциированных фибрилл, отличается чрезвычайно высокой устойчи- востью к действию физических и химических факторов. 1.2. Диагностика указанных инфекций основана на гистологичес- ком исследовании головного мозга животных, имевших при жизни симп- томы поражения центральней нервной системы и убитых в терминальной стадии болезни. 1.3. При подозрении на прионные инфекции в ветеринарную лабора- торию направляют головной мозг овец, коз и норок - целиком, круп- ного рогатого скота при первичной постановке диагноза - целиком, из неблагополучных по губкообразной энцефалопатии хозяйств - мож- но только стволовую часть (обязательно ромбовидный и средний мозг). 1.4. Головной мозг овец, коз, крупного рогатого скота или норок сразу же после извлечения из полости черепа непосредственно в хо- зяйстве или на мясокомбинате фиксируют в 10%-ном солевом растворе формалина, который готовят по следующей прописи: 8,5 г поваренной соли растворяют в 900 мл дистилированной воды, затем добавляют 100 мл формалина, содержащего 40% формальдегида. Объем солевого раствора формалина должен в 10 раз превышать объем фиксируемого головного мозга. Фиксацию головного мозга проводят в течение 14 суток со сменой фиксатора через неделю. 2. Патогистологическое исследование 2.1. Для гистологичечкого исследования вырезают поперечные ку- сочки толщиной 0,3 - 0,5 см из следующих отделов головного мозга: - на скрепи овец и коз - из продолговатого мозга (каудальная, средняя и краниальная части), варолиевого моста, четверохолмия, одновременно для исключения висны - дополнительно из коры голов- ного мозга (свод боковых желудочков) - рис. 1; - на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота - из продолговатого мозга (области задвижки и задних ножек мозжечка), среднего мозга (область ростральных холмов) - рис. 2 и 3; - на трансмиссивную энцефалопатию норок - из коры головного мозга (свод боковых желудочков), аммонова рога, варолиевого мос- та и ножек мозжечка. 2.2. Вырезанные кусочки головного мозга дополнительно фиксиру- ют в течение суток в аналогичном солевом растворе формалина, уп- лотняют в целлоидине или парафине, после чего готовят гистологи- ческие срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином. 2.3. При заболевании животных прионными инфекциями в гистопре- паратах головного мозга обнаруживают следующие патогистологичес- кие изменения: - скрепи овец и коз - дистрофические изменения нервных клеток, из которых диагностическое значение имеет массовая вакуолизация цитоплазмы нейронов, реже - гипертрофию и пролиферацию астроци- тов, вакуолизацию серого вещества; - губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота - вакуо- лизацию серого вещества, реже цитоплазмы нервных клеток, гипер- трофию и пролиферацию астроцитов; - трансмиссивная энцефалопатия норок - дистрофию, в том числе вакуолизацию цитоплазмы нейронов, гипертрофию и пролиферацию ас- троцитов, вакуолизацию серого вещества. 2.4. Диагноз на прионные инфекции при наличии характерных клинике-эпизоотологических данных ставят в случае обнаружения: - скрепи овец и коз - не менее 15 вакуолизированных нервных клеток в одном или не менее 20 в двух - трех гистопрепаратах; - губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота - вакуо- лизации серого вещества (в отличии от скрепи имеет основное диаг- ностическое значение) головного мозга или цитоплазмы нейронов; - трансмиссивная энцефалопатия норок - не менее 20 вакуелизи- рованных нервных клеток в одном гистопрепарате головного мозга. 2.5. Прионные инфекции необходимо дифференцировать: - скрепи овец и коз - от висни, листериоза (нервная форма), бешенства, болезни Ауески, отравлений различными веществами, а при наличии симптома зуда - от трихофитии, стрептотрихоза, дема- декоза, чесотки; - губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота - от листериоза, бешенства, болезни Ауески, инфекционного ринотрахеи- та (нервная форма), злокачественной катаральной горячки, губкооб- разности белого вещества головного мозга неизвестной этиологии, а также отравлений различными веществами; - трансмиссивную энцефалопатию норок - от алеутской болезни, самопогрызания, бешенства. 2.6. Срок исследования - не более 25 суток со дня начала фик- сации головного мозга животного. С утверждением настоящих Методических указаний на территории Российской Федерации не действуют Временные методические указания по патогистологическим исследованиям на скрепи овец и коз, утвер- жденные Главветупром Госагропрома СССР 17.01.87 № 432-5. ПРИЛОЖЕНИЕ к "Методическим указаниям по патогистологической диагнос- тике прионных инфекций живот- ных" от "06" мая 1997 г. №13-7-2/939 Скрепи овец и коз. Клинико-эпизоотологические данные. Длительный инкубационный период (не менее 9 месяцев). Заболевают только взрослые животные, чаще в возрасте от 1 до 4 лет. Симптомы поражения центральной нервной системы. Длительная клинико-морфологическая стадия болез- ни (не менее 4 - 6 нед , обычно несколько месяцев, редко до года). Отсутствие повышение температуры тела. Постепенное и постоянное выделение больных животных. 100% летальность. Избирательное пора- жение головного и спинного мозга. В естественных условиях узкий круг восприимчивых животных. Ведущим наиболее характерным и постоянным симптомом при скре- пи является атаксия: в начале болезни - неуверенные, некоординиро- ванные движения, спотыкания во время ходьбы; позднее - слабость конечностей, чаще тазовых, что обуславливает отклонение в стороны задней части туловища при ходьбе и падение при беге. По мере раз- вития болезни передвижение больных животных все более затрудненно, овцы часто падают не только при беге, но и при ходьбе, долго ле- жат, поднимаются с большим трудом. К исходу болезни может разви- ваться парез и паралич конечностей, чаще тазовых. Для ранней стадии болезни характерны беспокойство и пугливость животных. У больных животных отмечают частое переступание конеч- ностями, настороженность и неподвижность взгляда, сменяющиеся резкими движениями глазного яблока, скрежет зубами. У некоторых животных можно наблюдать частичную или полную потерю зрения, нап- ряженность и дрожание мышц шеи, дрожание губ, кивание, иногда кручение головой. При некоторых энзоотиях скрепи одним из ведущих симптомов яв- ляется зуд и, как следствие его, участки облысения, расчесы и по- грызы кожи, чаще наблюдаемые в области головы, шеи, спины, бедер, основания хвоста. Аппетит и упитанность у больных животных сохраняются длитель- ное время. В конечной стадии болезни развивается истощение живот- ных. На основании клинико-эпизоотологических данных можно поставить диагноз на медленные инфекции, но без дифференцировки на скрепи и висну. Патологоанатомические изменения. У животных, больных скрепи, при наличии при жизни симптома зуда обнаруживают участки облысе- ния и повреждения кожи. В терминальной стадии болезни отмечают атрофию скелетной мускулатуры. Редко выявляют гиперемию сосудов мягкой оболочки головного мозга. Патогистологические изменения. Для скрепи характерны альтера- тивные изменения при отсутствии воспалительных, симметричность поражений в головном мозге, губкообразность серого вещества го- ловного мозга, пролиферация астроцитарной глин. Альтеративные из- менения можно условно разделить на "специфические" и "неспецифи- ческие". К "специфическим" изменениям, имеющим диагностическое значение, относят массовую вакуолизацию нейронов, заканчивающуюся лизисом (выпадением) нервных клеток. Наиболее типичны однокамерные вакуо- ли, занимающие все или почти все тело нейрона. Реже встречают мно- гокамерные вакуоли. "Неспецифические" изменения представлены острым набуханием нервных клеток, очаговым или диффузным распылением хроматофильно- го вещества, хроматолизом, неравномерным гиперхроматозом и пикно- морфностью нейронов; набуханием, пикноморфностью, лизисом и экто- пией их ядер. Основные альтеративные изменения, в том числе и вакуолизиро- ванные нервные клетки, при скрепи локализуются преимущественно в продолговатом мозге и варолиевом мосту на уровне корешков У1 - ХП пар черепномозговых нервов. Диагноз на скрепи ставят на основании данных гистологического исследования с обязательным учетом клинико-эпизоотологических данных, характерных для медленных инфекций. Дифференциальная диагностика. Скрепи необходимо дифференциро- вать от висны, листериоза (нервная форма), бешенства, болезни Ауески, отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, кар- боматными, ртутьорганическими соединениями, фосфидом цинка, мы- шьяком, поваренной солью, а при наличии симптома зуда - от трихо- фитии, стрептотрихоза, демадекоза, чесотки. Дифференциальная диагностика скрепи и висны не представляет трудностей. Не смотря на наличие во многом сходных для обеих бо- лезней клинико-эпизоотологических данных, гистологически при скрепи в головном мозге обнаруживают альтеративные изменения, в том числе вакуолизацию нейронов, в то время как для висни харак- терны воспалительные изменения, в виде негнойного демиелинизиру- ющего менингоэнцефалита. Для нервной формы листериоза характерны: короткий инкубацион- ный период, болеют овцы всех возрастов, но ягнята в более тяжелой форме, острое течение, повышение температуры тела, быстрое рас- пространение болезни в хозяйстве, выделение возбудителя болезни - Listeria monocytogens. Гистологически в головном мозге выявляют изменения, характерные для гнойного воспаления. При бешенстве обнаруживают дессиминированный негнойный энцефа- ломиелит, а также тельца Негри в цитоплазме нервных клеток. Ост- рый негнойнюй менингоэнцефалит характерен для болезни Ауески. Эти болезни имеют короткий инкубационный период, острое течение. Болезнь Ауески быстро распространяется в отаре. Заболевают живот- ные всех возрастов. Для отравлений животных вышеуказанными веществами характерны симптомы поражения центральной нервной системы: возбуждение, сме- няющееся угнетением, клонические и тонические судороги, мышечная дрожь, ослабление рефлексов, сужение или расширение зрачка, атак- сия, парез и паралич конечностей. При этом обычно одновременно отмечают симптомы поражения орга- нов пищеварения (затрудненное глотание, диарею, реже запор и тим- панию), ослабление сердечной деятельности; при некоторых отравле- ниях - частое мочеиспускание. Течение отравлений, сопровождающих- ся поражением центральной нервной системы, острое или подострое, болеют животные всех возрастов, заболевание ограничено во време- ни, нередко выделяется большое количество больных в короткий от- резок времени. Гистологически в головном мозге (нередко и в спинном) обнару- живают расстройство гемодинамики (повышенное кровенаполнение со- судов, серозно-фибринозный отек их стенок, периваскулярные отеки, отек мозгового вещества), дистрофию нейронов (при некоторых от- равлениях их вакуолизацию), гибель нервных клеток с их распадом и образованием клеток-теней, демиелинизацию мозгового вещества, очаговые некрозы. При трихофитии, стрептотрихозе, демадекозе, чесотке изменения ограничиваются поражением кожи, при этом выделяют соответствующих возбудителей. Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота. Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период при губкообразной энцефалопатии длительный (не менее 20 месяцев). Симптомы болезни проявляются только у взрослых животных (от 20 ме- сяцев до 11 лет). Клинического проявления болезни у телят не от- мечают, но они могут быть инфицированы возбудителем губкообразной энцефалопатии. Для болезни характерны симптомы поражения центральной нервной системы: испуг, стремление к уединению, животное стоит с опущен- ной головой, часто упираясь ею в стену, спина дугообразно изогну- та, при движении, наоборот, позвоночник вогнут; повышенная возбу- димость, агрессивность, проявляющаяся боданием, ляганием, иногда клиникой бешенства; неадекватная реакция на прикосновение, шум (испуг, падение, мышечная дрожь, мигание, лягание); беспорядочное движение головой, трутся или бьются ею о стену; атаксия тазовых и грудных конечностей, провляющаяся неуверенной походкой, падением, особенно при беге и резких поворотах, бегом, похожим на бег рыса- ка, животное после падения поднимается с трудом; тремор, редко миоклонические судороги, могут сокращаться отдельные группы воло- кон мышцы, мышечная дрожь нижней части шеи, подгрудка, области плеча, реже других частей тела; обвислость или неправильное поло- жение ушей (напрвлены вперед или назад), может быть поднята верх- няя губа, ноздри расширены, чихание, фырканье, частое облизывание носового зеркальца, скрежет зубами. Указанные симптомы могут на- блюдаться в разных сочетаниях и с различной степенью выраженности. Повышение температуры тела не отмечают. Болезнь всегда прогрес- сирует и заканчивается петельно. Длительность клинико-морфологи- ческой стадии болезни от одного до пяти месяцев и больше. Могут быть отдельные случаи ремиссии. Патологоанатомические изменения. Ни вскрытии видимые изменения отсутствуют. Патогистологические изменения. Ведущее место среди изменений в головном мозге занимает вакуолизация серого вещества. Вакуоли- зация цитоплазмы нейронов встречается реже, чем при скрепи овец. Имеют место и другие виды дистрофий нервных клеток, но они само- стоятельного значения в диагностике болезни не имеют. Диагноз. Диагноз на губкообразную энцефалопатию крупного рогато- го скота ставят на основании результатов гистологического исследо- вания с обязательным учетом клинико-эпизоотологических данных, ха- рактерных для этой болезни. Дифференциальный диагноз. Губкообразную энцефалопатию необходи- мо дифференцировать от листериоза, бешенства, болезни Ауески, нер- вной формы инфекционного ринотрахеита, злокачественной катараль- ной горячки, губкообразности белого вещества неизвестной этиологий, а также отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, ртуть- органическими, карбоматными соединениями, фосфидом цинка, мышьяком, поваренной солью. Дифференциация от листериоза, бешенства, болезни Ауески основа- на на показателях, описанных при скрепи овец, за исключением более медленного распространения листериоза в стаде. Нервной формой инфекционного ринотрахеита болеют только телята, инкубационный период болезни короткий, течение острое, для гнете- картины характерен острый негнойный менингоэнцефалит. При злокачественной катаральной горячке инкубационный период от нескольких недель до нескольких месяцев, течение болезни чаще острое или подострое, болеет только взрослый скот (4 - 5 лет и старше), больные животные выделяются постепенно. Из гистологичес- ких изменений отмечают негнойный менингоэнцефалит с серозно- фиб- ринозными периваскулитами. При губкообразности белого вещества головного мозга вакуоли на- ходят не в сером, а в белом веществе. Этиология болезни не извест- на. Трансмиссивная энцефалопатия норок. Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период не ме- нее 8 месяцев. Болеют взрослые животные, в возрасте одного года и старше. Для болезни характерны симптомы поражения центральной - нервной системы: повышенная возбудимость, бесцельное бегание в клетке, неуверенная, шаткая, скованная походка, отрывистые резкие движения тазовыми конечностями. Хвост располагается поверх спины. Животные часто кусают его, при этом двигаются по кругу. К ранним симптомам относят исчезновение инстинкта поддержания чистоты клетки, отсутствие заботы о щенках, затрудненное глотание. При прогрессировании болезни характерно сильное истощение, животное перестает двигаться, обычно сидит в полусонном состоянии в углу клетки, вцепившись зубами в проводку. Отмечают легкий тремор, иног- да судороги. Продолжительность болезни 3 - 6 недель. Температура тела не повышается. Исход болезни летальный. Возможно бессимптом- ное течение болезни, при котором отмечают периодический отказ от корма, сильное угнетение, исхудание и смерть. Патологоанатомические изменения почти отсутствуют. Отмечают ис- тощение, исчезновение жировых депо в подкожной клетчатке, а также анемию и отек головного мозга. Патогистологические изменения. Для трансмиссивной энцефалопатии норок характерны: вакуолизация мозгового вещества, дистрофия нерв- ных клеток, пролиферация астроцитов. Устанавливают хроматолиз, пикноморфность и склероз нервных клеток коры, стволовой части го- ловного мозга и мозжечка. Наиболее характерны вакуолизация цито- плазмы нейронов и серого вещества, которые выявляют преимущест- венно в области свода боковых желудочков и в аммоновом роге. Диагноз на трансмиссивную энцефалопатию норок ставят на основа- нии обнаружения в головном мозге вакуолизации мозгового вещества, дистрофии, в том числе вакуолизации нейронов, пролиферации астро- цитарной глии. Дифференциальный диагноз. Трансмиссивную энцефалопатию норок необходимо дифференцировать от алеутской болезни, самопогрызания, а также от бешенства (см. скрепи овец). Алеутская болезнь протекает медленно и сопровождается сильным истощением. При вскрытии устанавливают тяжелое поражение почек, печени, селезенки, лимфатических узлов, желудка и тонкого кишеч- ника, чего не отмечают при трансмиссивной энцефалопатии. Патогис- тологически для алеутской болезни характерны периартерииты, в том числе некротические, гломерулонефрит, плазмоклеточная реакция в различных органах. Самопогрызание обычно отмечают у щенков норок в возрасте 45 суток, при котором обнаруживают травмы кожи.