Образец для лабораторного анализа должен состоять из растений с характерными признаками заболевания. Сильно пораженные растения необходимо срезать целиком, при поражении отдельных органов—пораженную часть, обязательно с захватом здоровой ткани. Отобранные образцы помещают в бумажные пакеты (ни в коем случае не в целлофановые), обязательно вложив этикетку с данными по сбору образца.

Отобранные образцы в кратчайший срок необходимо передать в ближайшую карантинную лабораторию, соблюдая меры предосторожности, исключающие распространение инфекции, и провести анализ на выявление заболевания. При обнаружении бактериального вилта кукурузы образец необходимо передать во ВНИИКР на подтверждение.

Семена кукурузы, поступающие на экспертизу на выявление внутренней инфекции, необходимо тщательно проанализировать. При поступлении небольших образцов (несколько десятков семян) анализируют весь образец полностью. От большой партии семян отбирают не менее 200 штук. Для анализа отбирают щуплые, деформированные семена, более темной окраски, с пятнами, с поврежденным зародышем.

Из бактериологической практики известно, что серологический метод диагностики, основанный на применении антигенных сывороток, является наиболее важным при экспертизе подкарантинных материалов и обследовании импортных посевов. Этот метод дает возможность в течение короткого времени дать ответ о зараженности образцов бактериозом.

6.1. Выделение из растений кукурузы чистой культуры возбудителя.

Отобранные образцы растений кукурузы нумеруют и описывают внешние признаки поражения растения. Затем с отобранных образцов делают посев на питательную среду (мясо-пептонный агар, картофельно-глюкозный агар) для выделения возможного возбудителя. Выросшие бактериальные колонии просматривают, сходные по морфологическим признакам с Erwinia stewartii описывают и отсевают на косой агар. Выделенные культуры проверяют постановкой серологической реакции с сывороткой.

6.2. Выделение из семян кукурузы чистой культуры возбудителя.

Отобранные семена кукурузы закладывают в чашки Петри (не более 7 штук на чашку) на питательную среду (мясо-пептонный или картофельно-глюкозный агар). Чашки ставят в термостат при 26-28°С. Первый просмотр проводят на 3-й сутки, второй - через неделю. Выросшие колонии просматривают, сходные с возбудителем вилта отсевают на косяки.

6.3. Постановка серологической реакции с выделенными из растений кукурузы культурами. Для выяснения наличия возбудителя бактериального вилта кукурузы в выделенных из образцов кукурузы бактериальных культурах проводят серологический анализ путем постановки реакции агглютинации с диагностической сывороткой. Проверяемые культуры выращивают на косяках с мясопептонным агаром. Из 2-х суточной культуры готовят суспензию в физиологическом растворе с титром 10 клеток/мл. Реакция агглютинации ставится в пробирках и на предметных стеклах, В случае постановки реакции в пробирках сыворотка разводится следующим образом: 0,1 мл сыворотки разводят в 4,9 мл физиологического раствора, получая таким образом рабочее разведение исходной сыворотки 1:50. В штатив расставляют агглютинационные пробирки (10-12 штук) и на них надписывают степень разведения сыворотки 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600, 1:3200, 1:6400, 1:12800, 1:25600. К этим пробиркам добавляют еще одну, которая служит контрольной. Таких серий пробирок берут три: две серии — разведенной иммунной сыворотки и одна — нормальной сыворотки. Два варианта с иммунной сывороткой необходимы для постановки реакции агглютинации с исследуемой культурой, выделенной из растения, и с типовой культурой Erwinia slewartii, взятой в качестве контроля, для сравнения проходящей реакции. Во все пробирки разливают по 0,5 мл физиологического раствора. В первых двух сериях пробирок разведения делают одинаково: в первую пробирку вносят 0,5 мл из основного разведения сыворотки, после чего приступают к последовательным разведениям, т. е. из первой пробирки после тщательного перемешивания внесенных в нее жидкостей переносят 0,5 мл во вторую пробирку, тщательно перемешивают, затем из второй в третью и т.д. до предпоследней пробирки, из которой после перемешивания 0,5 мл выливают. В последнюю пробирку сыворотку не вносят, так как она является контрольной. В ней имеется только физраствор. В третьей серии пробирок аналогично делают разведения нормальной сыворотки. В пробирки с разведениями нормальной сыворотки и один ряд разведенной иммунной сыворотки капают суспензию испытываемой выделенной культуры - по 1-2 капли в пробирку. Во второй ряд разведенной иммунной сыворотки капают по 1-2 капли суспензии Erwinia stewartii. Все пробирки встряхивают и ставят в термостат на 2 часа. Затем проверяют результаты реакции, начиная с контрольных вариантов—с пробирок с Erwinia stewartii, где должно наблюдаться выпадение осадка, и с пробирок с нормальной сывороткой, где должно быть равномерное помутнение. В случае выпадения хлопьевидного осадка в варианте с испытываемой культурой это указывает на то, что она является возбудителем бактериального вилта кукурузы, а образец, из которого она выделена, необходимо подвергнуть дополнительной тщательной проверке.

Для уменьшения объема работы по анализу образцов все выделенные культуры сначала проверяют путем постановки реакции агглютинации на предметном стекле. Для этого на предметное стекло наносят по капле нормальной и иммунной сыворотки (в разведении 1:100). Из двухсуточной испытываемой культуры готовят суспензию в физиологическом растворе с титром 10 клеток/мл. В каждую каплю на стекле вносят по капле испытываемой культуры. Размешивают содержимое капель стеклянной палочкой, начиная с нормальной сыворотки, и дают постоять 1-3 минуты, слегка покачивая стекло. Затем капли просматривают под лупой (увеличение х7). При прохождении реакции агглютинации в капле с иммунной сывороткой образуются хлопья, с нормальной — остается равномерная муть.

1. В целях предотвращения завоза возбудителя бактериального вилта кукурузы, при поступлении семян кукурузы из-за рубежа проводится карантинный досмотр и лабораторная экспертиза отобранных образцов. Зараженные партии подлежат возврату.

2. Для своевременного выявления бактериоза необходимо проводить регулярные обследования посевов кукурузы в течении вегетационного периода. Обследуются посевы кукурузы на интродукционно-карантинных питомниках и госсортоучастках, полях научно-исследовательских учреждений, опытных хозяйств, подсобных и фермерских угодий, засеянных импортными и отечественными сортами и гибридами.

3. В случае выявления заболевания на интродукционно-карантинном питомнике или госсортоучастке все растения скашивают и сжигают на зараженной делянке. При этом необходимо тщательно обследовать растения кукурузы на делянках, примыкающих к зараженной делянке. Посев кукурузы на данном поле производят через 3 года.

4. При выявлении очага в хозяйстве: на поле с сильной степенью заражения все растения скашивают и сжигают, при слабой степени — скашивают и используют внутри хозяйства на силос.

5. На хозяйство, где обнаружен очаг заболевания, накладывается карантин сроком на 3 года. Карантин налагается по представлению Госинспекции по карантину растений органами исполнительной власти на местах.

6. Профилактическими мероприятиями являются: уничтожение растительных остатков после уборки, соблюдение севооборота, оптимальные сроки сева, борьба с сорняками.