МИНИСТЕРСТВО
 СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
  И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
 РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхозпрод россии)

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ                           УТВЕРЖДАЮ
                                            Заместитель руководителя
10.06.99г.  № 13-4-2/1632                    Департамента ветеринарии
                                               В.В.Селиверстов
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по диагностике критидиоза шмелей

1. Общие положения

1.1. Критидиоз - болезнь рабочих особей шмелей, вызываемая
жгутиковым простейшим Crithidia bombi, которые прикрепляются к эпителию
тонкой и задней кишок или находятся в просвете кишечника. Паразита
обнаруживают в пищеварительном тракте маток и самцов шмелей.

Заражение происходит при заглатывании насекомыми цист паразита,
выделяемых с калом инфицированной маткой или контактах с загрязненной
поверхностью при нарушениях санитарных правил содержания шмелей.

Болезнь характеризуется снижением опылительной деятельности рабочих
шмелей, развитием у них яичников, появлением в гнезде нескольких
неоплодотворенных маток, дающих в потомстве самцов. Возможна гибель
плодной матки.

1.2. Диагноз на критидиоз ставят на основании отмеченных признаков
болезни при обнаружении паразитов в фекалиях и кишечнике насекомых.

1.3. Для диагностики в лабораторию направляют собранные в течение 2-3
суток фекалии маток, а также живых шмелей (2-3 рабочие особи) или свежие
(не более 1 суток с момента гибели) трупы в чистых сухих стеклянных
флаконах, пробирках или картонных коробках.

2. Лабораторные исследования

2.1. Обездвиженных живых или погибших шмелей кладут спинкой вниз,
глазными ножницами делают разрез по средней линии брюшка и осторожно
пинцетом извлекают кишечник. Его помещают в каплю воды на предметное
стекло. Препаровальной иглой отделяют мальпигиевы сосуды, вырезают
участок кишечника между задней частью средней кишки и передней частью
задней кишки.

2.2. Вырезанный участок кишечника вместе с его содержимым или
кусочек кала помещают в каплю воды на чистое обезжиренное стекло,
разбивают препаровальной иглой, полученную суспензию накрывают
покровным стеклом и микроскопируют (окуляр х 10, объектив х 40) в
затемненном поле зрения. Обнаруживают подвижные (хоаномастиготные) и
неподвижные (амастиготные) овальные или округлые формы паразита.

2.3. Окончательный диагноз ставят по результатам микроскопии
окрашенных препаратов. Каплю суспензии равномерно распределяют по
поверхности предметного стекла. Мазок сушат, фиксируют в спирт-эфире 15-20
минут и красят 0,25% раствором краски Гимза 14-16 часов. Окрашенные мазки
промывают водопроводной водой, сушат и микроскопируют под иммерсионной
системой микроскопа.

Обнаруживают овальные, грушевидные, размером 5-8 х 2,1-3,2 мкм клетки
с трубковидным или воронкообразным углублением на переднем конце с
выходящим из него жгутиком (7-12 мкм). Протоплазма клетки паразита
голубого цвета, центрально или ближе к заднему концу расположено округлое,
темно-фиолетовое ядро (1,2-1,3 мкм) и рядом с ним бобовидный красного                
цвета
кинетопласт (0,5-1,0 мкм). Неподвижные формы лишены жгутика, имеют
размер 3,8-5,5 х 1,4-2,0 мкм, ядро расположено центрально, кинетопласт
окрашен менее интенсивно, чем у подвижных форм. Цисты округлые (1,7 мкм),
покрыты толстой оболочкой, имеют ядро и кинетопласт.

Методические указания разработаны лабораторией профилактики
болезней и экологической охраны пчел Всероссийского научно-
исследовательского института экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ).